3血红蛋白的提取与分离分解.ppt

(2)红细胞的洗涤 ①洗涤红细胞目的 除去其中的杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少 ②洗涤操作 A、采集血样 B、低速短时间离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果） C、吸取血浆：上层透明的黄色血浆 D、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤 E、低速离心（低速短时间） F、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净 (3)血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白 (4)分离血红蛋白溶液 ①过程 将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min 第1层（最上层）：甲苯层（无色透明） 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体） 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体） 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色） ②试管中溶液层次 用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体 ③分离 取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时 (5)透析 除去样品中分子量较小的杂质 ①过程 ②透析目的 2、凝胶色谱 （1）凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1