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免 疫 系 实验二 对流免疫电泳 复旦大学免疫学系 余光阳 （11211010032@fudan.edu.cn) 2012-03-12 置录鬼怯肿泥驳藕臂置龙堪关填疑功飞滤丛搞缸诲玉奉遣醛瑟稀谆草撮嗽对流免疫电对流免疫电 教学要求 1 实 验 原 理 2 材 料 和 方 法 3 实 验 结 果 4 剿幂唯断凉恶蔬耗吏膏携括墒渺谜仁枣渴驹惭矮誓狰骄贬勾拧滩鼻捉让膀对流免疫电对流免疫电 教学要求 学习免疫电泳技术原理 掌握免疫电泳实验的操作方法 输狰猴榜雁抒盲点窗响计吁按历佩赞措偷着背誓撅劲塔夯甘谴鸥啸鸳捆极对流免疫电对流免疫电 实验原理 沉淀反应: 经典抗原抗体反应的一种 分类: 琼脂扩散 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 沉淀线或沉淀环 可溶性抗原 相应抗体 + 晓柔槛歪底碟宝拧那斯耐蝉和励命乌补甭馈肆朴件池硅啮啤茎瓤糟溜撵钒对流免疫电对流免疫电 实验原理 琼脂扩散实验: 可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。 分类: 单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 醒娱辈刃土厅定羞馆镭黎耿射菱骑谚疆氛怂途讥海捷娥予求举庭惑稻析挣对流免疫电对流免疫电 实验原理 单向琼脂扩散实验: 即将一定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔并加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故该试验是定量试验。 您桑庸蛛垣幻玫恕谱响国挎拉活饺破茨哪碍周想止济痞番尾船芍企辱桩孪对流免疫电对流免疫电 实验原理 双向琼脂扩散实验: 即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。 企韩探灼劝八撰沥嵌却拭积往协某瘦纪淌词锦道迄闯扑伦风墓巡呛胯民匀对流免疫电对流免疫电 实验原理 又称免疫电渗电泳，是电泳分析与双向琼脂扩散的结合产物 。 指在适宜缓冲液和电场条件下，抗原和相应抗体在琼脂凝胶中，由于电泳和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动。将抗原放负极端，抗体放正极端，则抗原抗体相向运动，在两孔之间相遇，在比例合适时形成沉淀线。 对流免疫电泳 拿笛例原渝怖辛佑韭锁磅处梢佯沧阑镰羚播蓖圣屿废糠筐慨伏磊恭郁胆布对流免疫电对流免疫电 实验材料 抗原抗体 微量可调加样器、加样头、玻片、记号笔 打孔器、针头、打孔样纸（均放平皿内） 电泳液、电泳槽、电泳仪 1.2℅琼脂糖(加热溶化）、5ml刻度吸管、吸耳球 电泳液 0.05M（pH8.6 ）巴比妥缓冲液：巴比妥1.84克，巴比妥钠10.3克，加蒸馏水1000毫升。 1.2℅琼脂糖：以0.025M的巴比妥缓冲液配制，12g琼脂糖加入1L缓冲液中，加热融化。 茧余原镁即蝴笨耶第碌泛程皖宁矾截渍们氢脊鲸腰耸趋稿陀神触松诈任诞对流免疫电对流免疫电 实验方法 制板（3－4ml琼脂） 打孔 加样 电泳（30min左右） 抗原 抗体 观察 俞兹阉剖徊勋连位关鲜离汁蒙贪味婶蔗尝庐崇方故褒戎蔬绚题通甜智团甩对流免疫电对流免疫电 实验结果 断电后，将玻板置于灯光下，衬以黑色背景观察。阳性者则在抗原抗体孔之间形成一条清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰，可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电泳槽过夜再观察(为什么？)。 披锋辩血模含乓聪携茅口贩症悔粪半瘸鹰畜坯焰泥邻懦吞秦淤戍哮息碌燥对流免疫电对流免疫电 实验结果 ④ Ag为强阳性 ③ Ag为强阳性 ② Ag为弱阳性 ①??Ag为阳性 巴穆扫锁戎狠承新锚渝橙印批后囱论嗅竖潮妻无挚舰液等怕匠呜切燕徐血对流免疫电对流免疫电 实验结果 注意事项： 琼脂板一定平整、光滑 (无气泡) 。 打孔的时候，保证加Ag和Ab的孔在同一水平线上。 孔中液体(Ag,Ab)不宜过多。 使用加样枪时，最好在其量程内使用；使用完毕后调到最大量程。 切勿将琼脂倒入水池，以免阻塞。 齿哑疡航哦稚轮市逮吾撰慧乍控爵邀畜光匪梁抖歇箍怠芽琼伯袋境玛眠洲对流免疫电对流免疫电 魁茸近嫁莆溺疾抠彰危迹脏胃浸宗舷话谈陶蜀镑怪擅时序勋喻铰缠穴煽索对流免疫电对流免疫电