高级生物化学专题二：模拟酶 详解.ppt

专题之二模拟酶的基础知识及进展 一，天然酶促反应的特点及作用机理1，? 天然酶促反应的特点 2,　酶的促作用机理 1），酶与底物结合的作用力： 静电吸引力 氢键 范德华力 疏水相互作用 。2），酶高效催化的机理： 邻近效应 多元催化； 微环境效应 诱导契合 底物变形　　 二，对酶活性中心功能团的模拟 酶催化中心的组成 胰凝蛋白酶对肽键的水解机理（第一步） 胰凝蛋白酶的水解机理（第二步） 胰凝蛋白酶的水解机理（第三步） 酶高效催化的机理及实例 姜勇 21200504084 一.决定酶高效催化的机理 1.底物和酶的靠近(proximity)与定向(orientation) 在化学反应中，反应速度与反应物的浓度成正比，若在酶促反应系统中的催化场所—酶的活性中心，增加底物浓度，反应速度也会随之增加。 酶促反应加速的原因之一，就是使底物分子集中于酶的活性中心，大大提高这个区域底物的有效浓度，从而加速酶促反应速度。 曾测过某酶促反应中，溶液中的底物浓度为0.001mol/L,而在活性中心的底物浓度竟达到10mol/L，比溶液中高出一万倍！因此在酶活性中心区域的高底物浓度决定了高的反应速度。 二.溶菌酶（lysozyme) 溶菌酶存在于鸡蛋清和动物的眼泪中，其生物学功能是催化某些细菌细胞壁的多糖水解，从而溶解细菌的细胞壁。 溶菌酶是第一个用X-射线法阐明其全部结构和功能的酶。是1922年伦敦细菌学家弗莱明(Fleming)首次发现的。 1.底物、溶菌酶及酶和底物复合物的结构 溶菌酶的底物 溶菌酶通过水解某些细菌细胞壁的多糖组份来溶解细胞壁，细胞壁的多糖由两种糖组成: N-乙酰氨基葡萄糖 (NAG) N-乙酰氨基葡萄糖乳酸(NAM) 溶菌酶的最适小分子底物 溶菌酶的结构 溶菌酶由129个氨基酸残基构成，是一个单链蛋白，分子内含有四对二硫键。活性中心的氨基酸残基是Glu35和Asp52 。 鸡蛋蛋清溶菌酶的氨基酸序列 溶菌酶和底物结合的空间构象 从表面构象看，酶的结构不很紧密，大多数极性氨基酸残基分布在分子的表面，非极性氨基酸残基分布在分子的内部。整个酶分子中有一狭长的凹穴。最适底物正好与酶分子的凹穴相结合，凹穴中的Glu35和Asp52 是活性中心的氨基酸残基。 对酶活性中心模拟的研究结果 诸多实验认为： 当模拟的分子中有Asp、Ser及His并处在适当的位置就有催化作用。例如：酪-组-组-苯丙-苯丙-门-组-丝-门-丝-苯丙-门-苯丙-组-苯丙 三，对酶作用方式的模拟 主要在仿金属方面做了大量工作： 四，胶束催化 胶束催化分二类：其一为胶束催化；其二为胶束模拟酶。 如，含有咪唑的或含有硫醇的阳性离子表面活性剂用来胶束催化，或使对硝基苯酯的水解加速104倍 （一），环糊精(Cycloamylose) 1, CD组成和在工业上的用途 2，CD的制法与性质 制法：淀粉糊化→酶解→沉淀 结构见下图 CD的一般性质 采用化学修饰可使CD有较多的疏水场 3，利用CD进行仿生反应 对CD进行修饰可提高对取代苯酚乙酸酯水解速率 B，裂解酶的模拟 (二)，褐藻多糖铈配合物的水解酶模拟 1，褐藻多糖铈配合物的水解模拟酶的研究意义 2，研究途径 3，研究结果 五，磷酯键水解酶模拟物研究进展 （一），生物分子中键及键能 1，共价键及键能 2, Ce4+所引起的DNA裂解可获得天然酶解无法得到的DNA片断 3， Ce4+ 对DNA水解的机理 要回答二个问题：What is the active –containing Ce4+ species for DNA hydrolysis? Why is Ce4+ overwhelmingly more active than other metal ions? 到目前为止，这些问题还没有完全清楚。可能的机理是： 3, Mechanism of DNA hydrolysis by Ce4+ Ce4+ + DNA ? [Ce4+2（OH）2]4+ ? OH-1对磷酸根的亲核作用 ? DNA水解 实验依据： 1， Ce4+ 对cAMP的水解时