第14章 全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 本 章 小 结 毛细管电泳型DNA测序仪的常见故障包括电泳时仪器显示无电流、电极弯曲、电泳时产生电弧等 平板电泳型DNA测序仪的常见故障包括电泳时仪器显示无电流、传热板粘住胶板等，应根据具体情况及时处理 本 章 小 结 蛋白质测序仪是检测蛋白质一级结构－氨基酸排列顺序的自动化仪器 目前的蛋白质测序仪实际上是执行全自动化的Edman化学降解反应和游离氨基酸的分离与鉴定过程 本 章 小 结 蛋白质测序仪包括测序反应系统、分析系统和数椐处理系统 主要应用于新蛋白质的鉴定、分子克隆探针的设计和抗原的人工多肽合成等方面 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、全自动DNA测序仪的结构与功能 全自动DNA测序仪 平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于0.4mm或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳 毛细管电泳技术将凝胶高分子聚合物灌制于毛细管中（内径50?m～100?m），在高压及较低浓度胶的条件下实现DNA片段的快速分离 平板型电泳 毛细管电泳 （一）仪器的组成 主机： 主要包括电泳系统、激光器和荧光检测系统 ；大致可分为自动进样器区 、凝胶块区 和检测区等结构功能区 微型计算机 各种应用软件 （一）仪器的组成 -- PE310 基因分析仪 PE310 基因分析仪的结构 凝胶块区 自动进样器区 检测区 （一）仪器的组成 -- PE310 基因分析仪 PE310 基因分析仪的主机分区 热板 毛细管 雷射检测器 注射器驱动杆 毛细管和电极 注射器 正极缓冲液 泵块 自动进样器 负极缓冲液 PE310 基因分析仪的基本结构 （二）仪器各组成部分的功能 1. 主机功能 具有自动灌胶、进样、电泳、荧光检测等功能 (1)自动进样器区功能 ①自动进样器受程序控制进行三维移动，因负极电极和毛细管均固定不动，故许多操作如毛细管进入样品盘标本孔中进样、电极和毛细管在电极缓冲液瓶、洗涤液和废液管中移动等均依靠自动进样器的移动完成； （二）仪器各组成部分的功能 ②电极为电泳的负性电极，测序过程中，正、负极之间的电势差可达15000伏，如此高的电势差可促进DNA分子在毛细管中很快泳动，达到快速分离不同长度DNA片段的目的； ③样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本； ④电极固定螺母起固定电极及毛细管的作用。 （二）仪器各组成部分的功能 (2)凝胶块区功能 ①注射器驱动杆：给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中。在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶； ②样品盘按钮：控制自动进样器进出； ③注射器固定平台：起固定注射器的作用； ④电极：为电泳的正性电极，始终浸泡在正极缓冲液中； （二）仪器各组成部分的功能 ⑤正极缓冲液阀：当注射器驱动杆下移，将注射器内的凝胶压入毛细管时，缓冲液阀关闭，以防止胶进入缓冲液；电泳时此阀打开，提供电流通道； ⑥玻璃注射器：储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力； ⑦毛细管固定螺母：固定毛细管； ⑧废液阀：在清洗泵块时控制废液流。 （二）仪器各组成部分的功能 (3)检测区功能 ①激光检测器窗口及窗盖：激光检测器窗口正对毛细管检测窗口，从仪器内部的氩离子激光器发出的激光可通过激光检测器窗口照到毛细管检测窗口上。电泳时，当荧光标记DNA链上的荧光基团通过毛细管窗口时，受到激光的激发而产生特征性的荧光光谱，荧光经分光光栅分光后投射到CCD摄像机上同步成像。窗盖起固定毛细管的作用，同时可防止激光外泄； （二）仪器各组成部分的功能 ②加热板：电泳过程中起加热毛细管的作用，一般维持在50℃； ③毛细管：为填充有凝胶高分子聚合物的玻璃管，直径为50?m，电泳时样品在毛细管内从负极向正极泳动； ④热敏胶带：将毛细管固定在加热板上。 激光检测器检测特征性的荧光光谱 C G T A C G C A T G A 激光检测器检测特征性的荧光光谱 DNA测序图 DNA测序图 （二）仪器各组成部分的功能 2. 微型计算机功能 控制主机的运行，并对来自主机的数据进行收集和分析。设置测序条件（样品的进样量、电泳的温度、时间、电压等），同步监测电泳情况并进行数据分析 3.各类软件功能 承担数据收集、DNA序列分析及DNA片段大小和定量分析等功