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第三章 培养基及制备 第一节 培养基选择和配制的原则 第二节 工业发酵培养基 第一节 培养基选择和配制的原则 培养基是提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的、按一定比例配制的多种营养物质的混合物。 培养基组成对菌体生长繁殖、产物的生物合成、产品的分离精制乃至产品质量和产量都有重要的影响。 所有发酵培养基都必须提供微生物生长繁殖和产物合成所需的碳源、氮源、无机元素、生长因子、水和氧气等。 大规模发酵生产中还必须重视培养基原料的价格和来源。 正交实验设计——多因子实验安排 根据问题的要求和客观条件确定因子和水平，列出因子水平表； 根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验； 根据正交表给出的实验方案，进行实验； 对实验结果进行分析（极差分析法和方差分析法），选出较优的实验条件以及对结果有显著影响的因子。 响应面分析法（response surhce analysis） 以回归方法作为函数估算的工具，将多因子实验中因子与实验结果的相互关系用多项式近似，依次对函数的面进行分析。 第二节 工业发酵培养基 消耗每克底物将产生最大的菌体得率或产物得率 能产生最高得产品或菌体的浓度 能得到产物的最大速率 副产品的得率最小 价廉并具有稳定的质量 来源丰富且供应充足 通气和搅拌。提取、纯化、废物处理等生产工艺过程都比较容易 一、工业发酵培养基的原料 二、培养基的制备 1、预处理： 原料除杂——除去混杂的小铁钉、杂草、泥快和石头等杂质。 粉碎——增加原料受热面积，有利于淀粉颗粒的吸水膨涨、糊化，容易流动输送。 2、液体培养基 将各种原料按配方要求及一定的加料顺序，投入到配料罐内，在搅拌作用下用水调成溶液或悬浮液，并预热到一定温度后，送入灭菌系统进行灭菌处理。 3、淀粉的水解糖的制备——双酶法 间歇（升温）液化法 将浓度30~40%淀粉乳调整pH到6.5，加入CaCl2 (0.01mol/L)和一定量α-淀粉酶(5~8u/克淀粉)，剧烈搅拌，加热到85~90℃，保持30~60 min，达到液化程度( DE 15~18 )，升温到100℃，灭酶10 min。 酶法糖化 将pH调整到4.2-4.5，加入糖化酶（150U/g淀粉），控制温度在60℃左右，糖化32 h，用无水酒精检验无糊精存在时，糖化结束，然后将pH调整至4.8-5.0，维持20 min灭酶。 * * * * 一、培养基的类型和用途 根据来源分： 根据主要成分或使用目的分： 根据生产工业的要求分： 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 基础培养基 增殖培养基 鉴别培养基 选择培养基 孢子培养基——供制备孢子用； 种子培养基——满足菌种生长； 发酵培养基——满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累 二、培养基的选择 从微生物的特点来选择 液体和固体培养基选择 从生产实践和科学试验的不同要求选择 从经济效益方面考虑选择生产原料 三、培养基的配制原则 必须提供合成微生物细胞和发酵产物的基本成分； 有利于减少培养基原料的单耗，单位营养物资所合成产物数量大或产率大； 有利于提高培养基产物的浓度，以提高单位容积发酵罐的生产能力； 有利于提高产物的合成速度，缩短发酵周期； 尽量减少副产物的形成； 减少对发酵过程中通气搅拌的影响，有利于提高氧的利用率、降低能耗； 有利于产品的分离和纯化；尽可能减少产生“三废”的物质。 三、培养基的配制原则 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基 营养成分的恰当配比（C/N） 渗透压，营养物质要有合适的浓度 合适的pH值 氧化还原电位 考虑营养成分的加入顺序，避免生产沉淀 四、培养基成分配比的选择 参照前人所使用的较适合于某一类菌种培养基的经验配方， 结合所用菌种和产品的特性， 采用摇瓶等小型发酵设备，对碳、氮、无机盐和前体等进行逐个单因子试验， 观察这些因子对菌体生长和产物合成量的影响， 综合考虑各因素的影响， 得到一个适合该菌种的培养基配方， 以得到高产。 四、培养基成分配比的选择 氮源过多，菌体繁殖旺盛，pH值偏高，不利于代谢产物的积累； 氮源不足，菌体繁殖量少，影响产量。 碳源过多，容易形成较低的pH值； 碳源不足，菌体衰老和自溶。 C/N不当影响菌体按比例吸收营养物质，直接影响菌体生长和产物形成。 注意速效碳、氮源和缓效碳、氮源的相互配合，选用适当的C/N。 一般发酵工业中C/N为100:（0.2～2.0） 在发酵工业中，必须使用廉价的原料来配制培养基，使之尽可能满足下列条件： 葡萄糖或糖蜜，总量的10％； 玉米浆，总量的4％～5％； 苯乙酸，总量的0.5％～0.8％； 猪油或植物油； 消泡剂，总量的0.5％ 大豆油，20mL/L； 甘油，20mL/L； 葡萄糖，20g/L； 玉米浆，12mL/L； 酪蛋白，12