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华南农业大学 农产品安全与检测实习总结 微生物污染及检测和农药残留测定 Niki Kim 08植保检测2班 资源环境学院 指导老师：黄继光 廖美德 杨晓云 2011/5/21 [主要记录本次农产品实习的一些实验方法及其结果，以及发现的问题和解决办法。另一方面也是走课堂走向实践的一个学习过程。]  目录 一、实习内容 2 二、农药残留试验准则介绍 2 三、实验部分 3 A.微生物污染及检测 3 1. 微生物污染检测之大肠菌群的测定 3 2. 黄曲霉毒素B1酶联免疫定量测试 4 B. 农药残留检验 7 1. 毒死蜱在生菜上的残留动态试验 7 四、参观学习 13 五、心得体会 14 六、参考文献 15 实习内容 农药残留试验准则介绍 时间：2011/05/10 地点：资源环境学院院楼620 主要内容： （1）农药残留实验准则的要求和意义 （2）重要术语和定义（农药残留，推荐剂量，安全间隔期等） （3）基本要求（农药残留试验单位 ，残留试验的设计原则等） （4）田间试验的设计（试验次数，地点，小区，供试作物，施药方法和次数等） （5）最终残留量试验（施药剂量，次数和时间，采收间隔期等） （6）消解动态实验（消解动态和半衰期的表示，试验种类，试验的剂量） （7）残留试验的样品采集和运输 （8）结果计算和表述 实验部分 微生物污染及检测 微生物污染检测之大肠菌群的测定 实验目的 掌握农产品检验过程中大肠菌群的测定方法以及了解大肠菌群的食品卫生学意义，巩固课程所学知识。 实验材料 实验样品：清水 实验用具：试管160*16、杜氏小管、脱脂棉、橡皮筋、移液枪、枪头、小烧杯、标签纸、伊红美兰培养基。 检测方法 乳糖发酵实验：样品稀释后（保证最高稀释度的试管均为阴性反应），选择3个稀释度，每个稀释度接种到3个乳糖发酵管中。36℃±1 ℃培养24h ±2h,,观察是否产气。 操作步骤 乳糖发酵管的制备与灭菌 根据乳糖发酵培养基的说明书，配制乳糖发酵培养基，分装到9支试管中，并将杜氏小管倒置于试管内，灭菌，备用。 大肠菌群的检测 分别取自来清水的含菌稀释液（x10）1ml，0.1ml和0.01ml，分别接种到乳糖发酵管中，每个稀释度3支，置36℃±1 ℃温箱内，培养24h ±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告无大肠菌群。 实验结果与分析 图像展示 [实验前] [实验后] 结果分析 实验结果显示乳糖发酵管都不产气，说明华农的自来水中无大肠菌群。 黄曲霉毒素B1酶联免疫定量测试 实验目的 了解固相酶联免疫吸附（ELISA）原理；掌握AFB1含量的测定方法及样品稀释液的配制。 实验原理 利用固相酶联免疫吸附（ELISA）原理，通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)，适用于各类食品、原粮及其制品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测，特点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读。 实验用品 ① 包被抗体的反应板 96/48/24孔 ② A试剂：样品稀释液 一瓶 ③ B试剂：AFB1标准溶液 一套（0.0.1,0.25,0.5,1.2ng/ml） ④ C试剂：酶标抗原 4/2/1瓶 ⑤ D试剂：酶标抗原稀释液 一瓶 ⑥ E试剂：浓缩洗涤液 一瓶 ⑦ F试剂：显色底物液a 一瓶 ⑧ G试剂;显色底物液b 一瓶 ⑨ H试剂：终止液 一瓶 ⑩ 反应板框架 一块 Added 样品稀释液（A试剂）的配制方法： ① 先配制PBS缓冲液体（ph7.4）:3.0gNa2HPO4.12H2O,0.25gNaH2PO4.2H2O，8.7g NaCl定容至1000ml。可根据实验需要按比例配制。 ② 样品稀释液：取100ml甲醇，加入900mlPBS缓冲液（PH7.4），混匀即得样品稀释液。可根据实验要求按比例配制。 实验准备 样品处理 取0.5g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚分数次将试样转移到125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液，此液为样品提取液。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将样品提取液进行适当稀释，即为待测样液。 试剂配制 每瓶C试剂（酶标抗原）中准确加入1.5mlD试剂（酶标抗原稀释液），充分溶解，