第六章：翻译预案.ppt

ATP水解为ADP提供能量，对于mRNA的结合是必需的。 在真核细胞，不仅elF的种类多，而且许多elF本身是多亚基的蛋白质。 mRNA5‘端帽的存在对于起始是需要的。 肽链的延伸 生成起始复合物， 第一个氨基酸（fMet/Met-tRNA）与核糖体结合以后，肽链开始伸长。按照mRNA模板密码子的排列，氨基酸通过新生肽键的方式被有序地结合上去。 每个循环 进位---AA-tRNA与核糖体结合 转肽---肽键的生成 移位 功能核糖体（起始复合物） AA-tRNA 伸长因子 GTP，Mg2+ 肽基转移酶 肽链的延伸需要 延伸过程 进位---新的氨酰-tRNA结合到A位： 该氨酰-tRNA 首先与EFTu·GTP形成复合物，进入核糖体的A位，水解产生GDP并在EF-Ts 的作用下释放GDP并使EF-Tu结合另一分子GTP，进入新一轮循环。 由于EF-Tu只能与fMet-tRNA以外的其他AA-tRNA起反应，所以起始tRNA不会被结合到A位上。 mRNA内部的AUG不会被起始tRNA读出，肽链中间不会出现甲酰甲硫氨酸。 转肽---肽键的形成 在核糖体·mRNA·AA-tRNA复合物中，AA-tRNA 占据A 位，fMet-tRNAfMet占据P位。生长肽链的C端与P位的tRNA分离，与新的氨基酸之间形成肽键。 核糖体通过EF-G介导的GTP水解所提供的能量向mRNA模板3’末端移动一个密码子，使两个tRNA完全进入E位和P位(去氨酰-tRNA被挤入E位；肽基-tRNA进入P位)，mRNA上的第三位密码子对应于A位准备开始新一轮肽链延伸 移位 原核生物中每次反应共需3个延伸因子，EF-Tu、EF-Ts及EF-G； 真核生物细胞需EF-1及EF-2，消耗2个GTP，向生长中的肽链加上一个氨基酸。 肽链延伸是由许多个这样的反应组成的： 核糖体的变构假说： 认为已经卸载的tRNA位于核糖体的E位点后引起核糖体结构的改变，导致A位点结构松弛并开放，对应于A位点的密码被tRNA识读的准确率提高。负载氨基酸的aa-tRNA-EF-Tu-GTP复合体进入A位点，并使核糖体再次变构，E位点松弛，对空载tRNA的亲和力下降，放出空载tRNA。 核糖体的变构与23S rRNA的结构有关，在2660nt区域存在一个α-次黄嘌呤的茎环结构，在GTP作用下迅速使E位变构，tRNA反密码子与密码子的识读结合能力提高。当G2661核苷酸突变为C后，核糖体变构速率受到影响，aa-tRNAaa~（EF）-Tu~GTP复合物进入A位，与茎环结构形成稳定结合态的速率下降，肽链的延伸速率也随之下降。 肽链异常现象： 以核糖体沿mRNA移动时导致读码框的移码居多。这种移码现象是核糖体在mRNA上或因中途暂停，或因向后或向前仅滑动了一个核苷酸，随后继续翻译，从而导致翻译中途改变读码框。 与移码类似的另一个现象是翻译跳跃，它可以使单个核糖体翻译多顺反子。是一种极端形式的翻译跨跃，此时核糖体绕过转录物一个很大区域，可能有几十个碱基，而跳跃事件发生后原来的肽链仍然继续延伸。跳跃起始点密码和跳跃终止的密码可以是相同的密码，也可以是不同的，但是是同工受体（tRNA）的密码。表明跳跃是受结合在延伸肽链上的tRNA所控制。 肽链的终止 GTP mRNA上的终止密码子 释放因子 肽链的终止需要 当终止密码子UAA、UAG或UGA出现在核糖体的A位时，没有相应的AA-tRNA能与之结合。 肽链的终止过程 第1984 ～ 2001 核苷酸之间存在能与tRNAMet序列互补的片段，表明核糖体大亚基23S rRNA可能与tRNAMet的结合有关。 23S rRNA： 第143～157位核苷酸之间有一段12个核苷酸的序列与5S rRNA上第72～83位核苷酸互补，表明组成50S大亚基的这两种RNA之间可能存在相互作用。 5.8S rRNA 真核生物核糖体大亚基特有的rRNA。 含有与原核生物5S rRNA中的保守序列CGAAC相同的序列，可能与tRNA作用的识别有关。 第四节、mRNA的结构和功能 mRNA是蛋白质合成的模板 所有的mRNA都具有两个必需特征： 一段可翻译的密码序列--- 开放阅读框架（ORF） 一个核糖体结合位点--- Ribosome Binding Site，RBS 原核生物mRNA的结构特征： 一个转录物包括多个顺反子，每个顺反子可翻译出一个独立的多肽链。 每个顺反子的第一个密码子AUG上游有一个重要特征是Shine-Dalgarno序列（SD序列），同16S rRNA 3’端的序列互补， 是mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。 核糖体结合位点的确认 真核生物mRNA的结构特征： 单顺反子。 需要经过转录和转录后加工成为成熟mRNA。 第一个密码子AUG的上游是核糖体