分子生物学期中考试.doc

1.广义的分子生物学：蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能的研究都属于分子生物学的范畴，即从分子水平阐明生命现象和生物学规律 狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、 表达和调控等过程，以涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究 2.What is Molecular Biology? Molecular biology seeks to explain the relationships between the structure and function of biological molecules and how these relationships contribute to the operation and control of biochemical processes. ---Turner et al. Molecular biology is the study of genes and their activities at the molecular level, including transcription, translation, DNA replication, recombination and translocation. --- Robert Weaver 3. 遗传物质的特性: ①存储并表达遗传信息；②能把遗传信息传递给子代；③物理和化学性质稳定；④有遗传变异的能力。 4.三个经典实验：肺炎双球菌的转化实验1944，首先证明DNA是遗传物质；噬菌体感染实验1952进一步肯定DNA是遗传物质；病毒重建实验1956证明RNA是遗传物质 5．发展史： 碱基配对原则：不同生物种属的DNA的碱基组成不同；同一个体的不同器官或组织的DNA碱基组成相同 对于一特定组织的DNA，其碱基组分不随年龄、营养状态和环境而变化[A] = [T]，[G] ≡ [C] A+G=T+C,嘌呤碱总数与嘧啶碱总数相等 DNA分子的双螺旋结构模型；中心法则 1.遗传物质 DNA携带两类不同的遗传信息：a、编码蛋白质和RNA的信息(编码tRNA、 rRNA) b、编码基因选择性表达的信息； RNA也可作为遗传物质 ： RNA病毒TMV 类病毒 蛋白质作为遗传物质：朊病毒 2.DNA化学组成：碱基（嘧啶嘌呤ATCG）、核苷、核苷酸 DNA一级结构：多聚核苷酸链主链是核糖和磷酸侧链为碱基由3’,5’磷酸二酯键连接 链的方向：同一个磷酸 基的3’酯键到5’酯键的方向 (5’→3’) 3. DNA双螺旋模型：每一单链具有 5‘ 3’极性 两条单链极性相反,反向平行 两条单链间以氢键连接 以中心为轴，向 右 盘 旋 （直径2nm） 双 螺 旋 中 存 在大，小 沟 双螺旋模型参数：直径20?；螺距为34?（任一条链绕轴一周所升降的距离）；每圈有10个核苷酸 ；两个碱基之间的垂直距离是3.4?。螺旋转角是36度；有大沟和小沟配对碱基并不充满双螺旋空间，且碱基对占据的空间不对称 影响双螺旋结构稳定性的因素 ：氢键 ，磷酸酯键 ，碱基堆积力 (非特异性结合力)，疏水作用力 。不稳定因素：磷酸基团间的静电斥力，碱基内能增加(温度), 使氢键因碱基排列有序状态的破坏而减弱 双螺旋结构的基本形式 ：B-DNA 此外人们还发现了A、C、D、E等右手双螺旋和左手双螺旋Z构象等形式 DNA结构的多态性：几种不同的DNA双螺旋结构以及同一种双螺旋结构内参数存在差异的现象 一些DNA序列的不寻常结构：1、反向重复序列又称回文序列（廻文）：指两段同样的核苷酸序列同时存在于一个分子中,有时也有不完全相同的情况 较短的回文序列可能是作为一种信号如：限制性内切酶的识别位点一些调控蛋白的识别位点 4. 变性（denaturation 或融解 melting）：DNA双螺旋区的氢键断裂，使双螺旋的两条链完全分开变成单链，这一双链分离的过程叫做变性。1、条件：加热, 极端pH,有机溶剂（ 尿素、 酰胺 )，低盐浓度等 Tm = OD增加值的中点温度(一般为85-95℃)或DNA双螺旋结构失去一半时的温度 影响 Tm值的因素 ：在 A, T, C, G 随机分布的情况下 ，决定于GC含量；GC%含量相同的情况下碱基排列对Tm值具有明显影响从嘌呤到嘧啶方向的碱基堆积力作用显著地大于同样组成的嘧啶到嘌呤方向的碱基堆积作用 DNA分子的复性 ：变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的链又可以重新地合成双螺旋结构的过程（退火） 影响DNA复性过程的因素 ：阳离子浓度；复性反应的温度，低