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酶的历史 一、概念 ????酶工程亦称酶工艺,是在生物反应器中,利用酶的催化作用,将相应的原料转化为有用物质的技术 酶工程与发酵工程密切相关,是发酵工业发展的产物,是酶学原理与化工技术相结合而形成的一门理论性很强的应用技术。主要内容包括各种酶的开发、生产和利用,酶的分离、纯化技术、酶的化学修饰技术,固定化技术,酶反应器的研制和应用等。 ????酶是生物催化剂,是生物体产生的具有活性的蛋白质。它可高效、专一地催化特定的生化反应,酶的催化作用可使反应速度提高10的8次到10的20次倍。酶促反应具有反应条件温和、能耗低、污染小、操作简单等优点。 ? 2、1961 年国际生化联合会酶学委员会提出将酶分为: 氧化还原酶:在生物体内参与产能、解毒和某些生物活性物质的合成; 转移酶:在生物体内将某功能基团从一个化合物转至另一个化合物; 水解酶:在生物体内外起降解作用,是人类应用最广的酶类; 裂解酶:可脱去底物上某一基团而留下双链,或可相反地在双链处加入某一基团; 异构酶:依生物代谢需要对某些物质进行分子异构化; 连接酶(合成酶):关系着许多生命物质的合成; 3、酶蛋白有3种组成形式: 单体酶:是仅有1个活性部位的多肽链构成的酶,分子量为13000-35000 。 寡聚酶:是由若干相同或不同的亚基结合而组成的酶。 多酶复合物:是指多种酶进行连续反应的系统,前一反应产物为后一反应的底物。 二、酶的探索与发现: 公元前800年,古老的烹调方法中已使用来自微生物的酶。 1833-1835年,淀粉的第一次酶解法国化学家Anselme Payen和ean-Franois Persoz描述了从大麦的麦芽中分离淀粉酶多聚体的过程,并将之命名为淀粉酶。 1836年,德国生理学家Theodor Schwann在研究消化过程时,分离出一种在胃内消化蛋白的物质,将它命名为胃蛋白酶。这是第一个从动物组织中提取到的酶。 1883年,Johan Kjeldahl建立了一套检测有机物中-3价氮的方法,即测定氮的含量的方法。 1894年,加酶食品的第一次商业化生产 1894-1913年,德国化学家Emil Fisher根据糖化酶的特点建立了钥匙-锁理论。 1926年,科学家发现酶是蛋白质 1953-1958年,Watson 和 Crick发现DNA是双螺旋结构 1963年,碱性蛋白酶--洗涤剂用酶的突破 1965-1974年,淀粉工业的重大突破随着一种可以将淀粉分解成糖的,不含转葡萄糖苷酶的葡萄糖淀粉酶上市,微生物酶类应用于食品工业的首次重大突破于20世纪60年代发生。 ? ?
酶的生产和利用
一、微生物酶制剂的生产
主要有以下步骤:
1、目的酶生产菌株的分离筛选
(1)从自然界分离筛选
(2)用物理、化学因子处理诱变
(3)用基因重组或细胞融合技术选育
2、酶的生产
(1)要选择好的培养方法,包括培养基组成配比、培养温度、pH 值、通气量等。
图:微生物在相当于三层楼高的发酵罐里生长繁殖,产生所需的酶
(2)确定工业规模大量生产的一系列工程和工艺条件,以及培养罐的形式、大小、通气条件、温度和 pH 值的控制等。
图:通过改变培养基类型、酸碱度、氧气浓度和温度,研究人员现了生产某种酶的微生物的最佳生长条件。
三、酶的提取、分离和纯化
1、微生物酶制剂的工业提取步骤大致如下:
如果是胞内酶,则首先要分离收集其菌体,使之破碎,将酶提取至液相中,此为出发酶液;
如果是胞外酶,它的深层发酵液或固体培养物的抽提液则为出发酶液。
2、制取工业酶制剂的步骤:
第一步——除去出发酶液中的悬浮固形物,获得澄清酶液,必要时再进行减压浓缩;
第二步——根据质量要求和经济性采用适当方法(如用盐析法、有机溶剂沉淀法、丹宁沉淀法等)将酶沉淀分离;
图:只有酶和水能通过转鼓式过滤机;培养基和微生物则被留在硅藻土上。
第三步——收集沉淀、干燥、研粉、加适当的稳定剂、填充剂、做成粉末制剂。
(?? ????酶粒是在大型连续运转的水平混合机内生产出来的。提取的酶与盐、纤维素及其他成分混合形成0.5mm大小的粒状物。然后用一种聚合体包裹,以防止酶尘在使用过程中可能引起的致敏危险。
图:用多聚体包裹酶以减少酶尘引起的致敏危险。
3、其他方法
????对于质量要求高可提取液中共存有妨碍目的酶工艺效果的其他酶时,常用一些特殊纯化方法将目的酶与其他酶和杂蛋分开,再分别沉淀制取。常用的方法有:
( 1 )蛋白质选择性变性法
( 2 )分级盐析法
?? 有机溶剂分级沉淀法
?? 等电点法
?? 柱层析法
?? 电泳法
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