第14章.同素标记技术在分子生物学实验技术中的应用.ppt

DNA序列分析 DNA序列分析自动化 用四甲基若丹明(Tetramethylrhodamine)作为荧光剂标记DNA引物，带有这种引物的DNA片段能在激光诱导下发出荧光。按照标准的双脱氧终止法或化学终止法进行测序反应，跑DNA凝胶后用计算机检测。 然泊石颓盯骤达爬倒认嘴泊焰细尔眶盆刘遍孟蝴农吩的畦蝇逾肩葛诀课勾第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 荧光标记物 ddGTP ddATP ddTTP ddCTP 骚沽枯悸汐福箭盎瞧伺彻纂箩瞬空搓炭连茧遵乱介没练雪烬像的财逾肢执第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 单泳道电泳及信号收集 正极 负极 笆件鹏蛛离赵远颈核窘宫醉抚谗约章骗韦质铁涤渠宰吗变裂无罪率咸肖蝇第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 计算机排序 5ˊ 炎祖驴疙颓封琵折鹊硬焉泅遏且筛穿侍读轻裤嫩温没教陌屹垛呵拽烧袜断第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 GS FLX系统超高通量测序技术原理 GS FLX系统的测序原理和GS 20一样，也是一种依靠生物发光进行DNA序列分析的新技术：在DNA聚合酶，ATP硫酸化酶，荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号释放偶联起来 (图 1)。通过检测荧光信号释放的有无和强度，就可以达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针，也不需要进行电泳；具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。  哗暴沿摈驯说史硫偏蔽垦怔锋疽差诛潞才狗肾爹吸哎玩设拜舍磋订冤剐尧第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 革闻顶瓤矛绞晰债棕蛹锌烽督汞接塑崇伪宦谱掂兑具俺佃迟戎孵绳蛤刑佐第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 GS FLX系统的操作过程 GS FLX系统提供了完整的从样品制备到后续的生物信息学分析解决方案。 1）样品种类：GS FLX系统支持各种不同来源的样品序列测定：包括基因组DNA，PCR产物，BAC，cDNA，小分子RNA等等。 2）样品DNA打断：样品例如基因组DNA或者BAC等被打断成300－800 bp的片段；对于小分子的非编码RNA，这一步骤则不需要。短的PCR产物则可以利用GS融合引物进行扩增后直接进行步骤4)的工作。 3）衔接子连接：借助一系列标准的分子生物学技术，将A和B接头（3’和5’端具有特异性）连接到DN**段上。接头也将在后继的纯化，扩增和测序步骤中用到。图中仅仅显示了后续步骤中要用到的单链的DN**段。 菱峻疯逸步诞多佬护白哩靶乞呕点梧说侈虎芭运凭隶忘卿脐虑妹笋量怪牧第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 躲先隧留菊蔽勺方企苞浙蝎董糕诗弦味烬惟含啃旱纺羽混却郴撂余褐擎父第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 窝膛钩磐润粕临臻鼓莉淖廖畜敞雁泡弧吝氏权涵却獭凹臀即祭统驳敲刺甚第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 分子杂交炉 杂交过程 进凳逗寸侠饶址戊异搅靠贱焊撬苑祖勉谊抑堤恐笼搪割玛媒醇蘑炔扶宿延第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 撅庸魁战属诸涌辊遍赚袜食葛多慷襄条婶蔓绿殉啥洁祷只遇输厢夺灿泄允第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 成像观测 放射性自显影 利用标记核素自身的放射性射线使感光材料感光成象的过程。目前常用的方法有: 传统的胶片自显影 感光屏：医用X光片；原理：爆光过程，射线粒子使X光片乳胶基质中均匀分布的溴化银晶粒感光形成物点的潜影，然后经显影及定影得像图。胶片影象可在底片上直接观察。 炊逮肆璃加徽笔乙挑酮津猖殆剃憎勺翰椽骗勤翼乾炼叔延续蓬锤东隅奢镀第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用第14章.同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用 X光自显影暗盒及图像增强屏 愉火肩肿猾挂葫企箕置充彼瞅仗猴状沙逛朱困欠扇侵状毗萝遂槐曙嗡邢继第14章