生物仪器分析讲义第三章.pptVIP

2、火焰离子化检测器（FFD） 工作原理：以氢气在空气中燃烧生成的火焰为能源，当有机物进入火焰时，发生离子化反应，生成正负离子，在火焰周围设置一个电场，在电场的作用下，离子会定向运动形成离子流，这种离子流产生的电信号强度与组分的浓度或质量成正比。 3、火焰光度检测器（FPD) 基本原理是：当含S.P的有机物在氢气火焰中燃烧生成特殊的化学物质，这些物质可以发射出特征波长的光，这些信号的强度与相应的组分的浓度或质量成正比。 4、电子捕获检测器（ECD） 基本原理是：在放射源的作用下，使通过检测器的载气发生电离，产生次级和正离子，在电场的作用下，会形成一个恒定的基流，当电负性化合物进入检测器的时候，就会捕获自由电子，形成稳定的负离子，这些负离子与载气正离子复合成中性化合物，使电流降低，产生负的检测信号，也就是一个倒峰，倒峰的大小与被测组分浓度成正比关系。 （五）温控系统 汽化室、色谱柱和检测器恒温箱等都需要进行加热和控温。 气化室：保证液体试样瞬间气化。 色谱柱：准确控制分离需要的温度。当试样复杂时，分离室温度需要按一定程序控制温度变化，各组分在最佳温度下分离。 检测器：保证被分离后的组分通过时不在此冷凝。 （六）数据处理系统 二、毛细管气相色谱仪 1957年，美国工程师Golay明了毛细管色谱柱，又称为开管柱。 毛细管柱的主要特点： 1、分离效率高，总柱效高 2、分析速度快，柱阻力小 3、进样量小，柱容量小 常规的毛细管柱的材料大多是熔融石英，通常在它的外表面涂上一层聚酰胺或聚酰亚胺保护层，毛细管柱的内表面也要进行相应的处理后，再涂渍上固定相。 毛细管柱分类： 1、壁涂开管柱（wall－coated open　tubular column，WCOT柱）：将固定液直接涂敷在管内壁上。 2、载体涂层开管柱（support-coated open tubular column，SCOT柱）：将非常细的载体微粒粘接在管壁上，再将固定液涂于载体上。 3、多孔层开管柱（porous-layer open tubular column，PLOT柱）：在管壁上涂敷一层多孔性吸附剂固体微粒，再将固定液涂于多孔固体上。构成毛细管气固色谱。 4、填充毛细管柱 毛细管柱内径很细，因而带来三个问题： （1）允许通过的载气流量很小。 （2）柱容量很小，允许的进样量小。 （3）分流后，柱后流出的试样组分量少、流速慢，达不到检测器的最佳操作要求。 毛细管柱色谱采用分流进样，以适应毛细管柱柱容量小的特点。它是将样品在气化室内气化并与载气均匀混合，然后分成两个不相等的部分，小部分引入色谱柱，大部分通过放空管线放空。 尾吹气路又叫辅助气，是未经色谱柱但与色谱柱出口相连，直接进入检测器的一路补充性载气。辅助气可保证检测器在高灵敏度状态下工作。 三、色谱条件的优化 从待测样品的预制备开始，在最佳或最合适的气相色谱仪器的分析条件下进行分离测定，得到最符合测定要求的定性或定量的结果，是色谱条件优化的目的。 在气相色谱测定的过程中优化需要考虑的因素主要包括样品的预制备，仪器的配置和操作条件的选择。 四、GC测定方法及结果报告 1、定性定量方法 定性分析主要是确认色谱峰的有无及种类。 利用保留值定性 与其他分析仪器联用的定性方法 定量分析的方法主要有峰面积（或峰高）百分比法，归一化法，外标法，内标法等。 (1)峰面积（或峰高）百分比法 xi=(Ai/∑Ai) ×100% 此法最简单，但不准确，要求样品中所有组分均出峰。 (2)归一化法：样品中所有组分均出峰，同时要已知各组分的定量校正因子。 xi=(Aifi/∑Aifi) ×100% 特点及要求： 归一化法简便、准确； 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大； 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。 (3)外标法：外标法也称为标准曲线法。标准物与待测物是同一化合物，先用纯化合物配制成已知浓度的标样，在相同色谱条件下分析标准样和未知样。 xi=(Ai/AE) ×XE 特点及要求： 外标法不使用校正因子，准确性较高， 操作条件须严格重现，操作条件变化对结果准确性影响较大。 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。 (4)内标法：在样品中加入一种纯的物质作为内标物，根据内标物与待测组分的定量校正因子，内标物和样品