Vasohibin―1在结肠癌细胞共培养体系中对血管内皮细胞作用的研究.docVIP

Vasohibin―1在结肠癌细胞共培养体系中对血管内皮细胞作用的研究摘要：目的 探讨Vasohibin-1在人结肠癌细胞株SW480和人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共培养体系中对HUVECs的作用。方法 通过四甲基偶氮唑蓝评价Vasohibin-1对HUVECs的抑制作用；以流式细胞术测定HUVECs凋亡率。结果 Vasohibin-1能抑制人结肠癌细胞株SW480和HUVECs共培养体系中HUVECs增殖；流式细胞术测定显示随其浓度的增加HUVECs的凋亡率在逐渐增加。结论 Vasohibin-1能促进人结肠癌细胞株SW480与HUVECs共培养中HUVECs的凋亡。关键词：血管生成抑制因子-1；血管内皮细胞；凋亡Abstract：Objective To study the mechanism of Vasohibin-1 on promoting the apoptosis of human umbilical vein endothelial cells（HUVEC） in colonic cancer cell line SW480 co-culture system. Methods Tetrazolium blue was used for the evaluation on proliferation inhibition of Vasohibin-1 in HUVECs；flow cytometry was used to determine the apoptosis rate.Results Vasohibin-1 can significantly inhibit HUVECs proliferation and promote its apoptosis in SW480 co-cultured system.Conclusion Vasohibin-1 can promote HUVECs apoptosis in colonic cancer cell co-cultured system.Key words：Vasohibin-1；Vascular endothelial cells； ApoptosisVasohibin-1是近年来发现的一个血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor A，VEGF-A）的负反馈调节因子，其促进血管内皮细胞的凋亡，文献报道它在多种肿瘤组织中表达[1]。但是，尚未见其对结肠癌血管内皮细胞作用的研究报道。因此，本研究建立人结肠癌细胞株SW480和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）体外共培养体系，探讨Vasohibin-1对结肠癌血管内皮细胞的抑制作用。1 资料与方法1.1一般资料 人结肠癌细胞株SW480（武汉博士德生物工程有限公司）、HUVECs（天津市泌尿外科研究所）；DMEM培养基（美国Gibco公司）、Vasohibin-1抗原（美国Santa Cruz公司）。Transwell迁移小室（直径6mm，孔径5μm，Corning公司）； Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒（美国BDpharmingen公司）。1.2方法1.2.1SW480细胞和HUVECs共培养体系的建立 取对数生长期的SW480和HUVECs，分别采用0.25%胰酶和0.02 %EDTA1∶1混合消化液进行消化，加入DMEM培养基分别制备成1×105细胞/ml的SW480单细胞悬液和5×105细胞/ml的HUVECs单细胞悬液，将6孔板Transwell小室的下室接种HUVECs，上室接种SW480细胞，加入含10%胎牛血清的DMEM培养基。将Transwell板置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中培养，建立共培养体系。1.2.2 Vasohibin-1在共培养体系中对HUVECs的抑制作用 待下室HUVECs长至75%～85%融合度时，用含胎牛血清的DMEM培养基稀释Vasohibin-1至所需浓度。Vasohibin-1的浓度分别为5、10、20、40、80、100μg/ml，阴性对照组加100μl培养基代替，阳性对照组以贝伐单抗（终浓度30μg/ml），另设本底对照孔。待孵育48h后，弃去每孔的含药血清，重新加入1ml不含血清的培养基，另加入MTT液（5mg/ml）20μl，培养箱中孵育4h，弃去液体，每孔加入二甲基亚砜150μl，震荡溶解10min，酶标仪读取各孔吸光度A值。计算HUVECs的生长抑制率。1.2.3流式细胞术测定HUVECs凋亡 按1.2.2接种细胞，并给予相应药物。培养48h后，根据下述步骤采用Annexin V-FITC试剂盒测定