荧光光谱..pptVIP

荧光光谱 荧光简介 常用荧光光谱及特征 荧光强度影响因素 荧光光谱的光谱参数 用途 荧光：某些物质受到照射后发出能量较低的光，一旦光照停止，光线也立即消失，称为荧光。入射光和发射光频率之差称为斯托克频移。 满足上述条件即为荧光。因此荧光范围比较宽，从X射线到红外光谱区仍然是荧光。 其他的能量如（化学反应、加热、生物代谢等）也会有荧光。生活中很多现象都与荧光相关。如：钞票防伪，日光灯管，萤火虫发光。 1.荧光介绍 1）荧光产生及其物理机制 S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 a)光吸收：荧光物质从基态跃迁到激发态，过程约10-15s。此时，荧光分子处于激发态。 b)内转换：处于电子激发态的分子由于内部的作用，以无辐射跃迁过渡到低的能级。 c)外转换：处于电子激发态的分子由于和溶剂以及其他分子的作用，以及能量转移，过渡到低的能级 d)荧光发射：如果不以内转换的方式回到基态，处于第一电子激发态最低振动能级的分子将以辐射的方式回到基态，平均寿命约为10ns左右。 e)系间转换：不同多重态,有重叠的转动能级间的非辐射跃迁。 如 电子自旋改变，禁阻跃迁，通过自旋—轨道耦合进行。 f）振动驰豫：高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。发生振动弛豫的时间10 -12 s。 2.常用荧光光谱 1）荧光的激发光谱，发射谱 激发谱：固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光强度与激发光波长的关系曲线 。 荧光光谱有瞬态荧光光谱和稳态荧光光谱两类。 通常荧光光谱指的是稳态荧光光谱。 荧光的发射谱：固定激发波长，发射强度与发射波长的关系。 荧光光谱特点 灵敏度高 ：比紫外-可见分光光度法灵敏度高 2-3个数量级，比原子吸收分光光度法高103 ～104 倍，检测限可达ng／mL 线性范围宽: 0.005mg/L-50mg/L 分析成本低 设备简单，操作简单快速，计算机进行仪器控制和数据处理 提供激发光谱、发射光谱等许多信息 2).荧光光谱的特征 a.Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。 b.发射光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量(如能级图? 2 ,? 1)，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光(如? ‘2 )。 c. 镜像规则 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对称关系。 3 .荧光光谱仪及使用 技术 光源 激发单色器 样品池 检测器 发射单色器 检测器 荧光是散射谱，所以一般在垂直入射方向接收。背景是没有入射光，是“暗背景”，因此灵敏度更高。 1）荧光光谱仪 * 光谱测试 开机 电源——灯源 2.发射谱 根据吸收谱中感兴趣的峰确定激发波长，选择合适的发射谱波长范围、滤光片、光路狭缝、扫描速度等进行发射谱的扫描。 3.激发谱 根据发射谱中感兴趣的峰确定发射波长，选择合适的激发谱波长范围、滤光片、光路狭缝、扫描速度等进行激发谱的扫描。 * 4.发射谱 根据激发谱中感兴趣的峰确定激发波长，选择合适的发射谱波长范围、滤光片、光路狭缝、扫描速度等进行发射谱的扫描。 5.重复3、4步循环扫描得到理想的光谱图。 7.关机 光源——电源 6.保存数据 * 光谱数据处理 测得的数据结果需要应用origin软件进行数据处理和作图分析。 为了消除仪器本身的影响，测得的光谱曲线需要应用校正曲线进行校正。 校正过的光谱数据可以应用色坐标软件进行颜色分析。 荧光随着浓度增高，强度反而减小，称为浓度猝灭。 原因可能是： a 浓度增加，分子碰撞机会增加，增加了非辐射损耗。 b 溶液中其他杂质吸收发出的荧光。（内滤光） c 吸收谱和发射谱重叠，荧光又被吸收。（自吸收） d 仪器原因 3）.荧光光谱的环境效应 5. 荧光实验方法及其用途 荧光猝灭 荧光偏振 荧光能量共振转移 时间分辨荧光光谱 荧光标记 荧光猝灭泛指任何可以减低样品荧光强度的过程。 狭义主要指那些由于荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用所引起的荧光强度降低的情况。 原因：溶剂猝灭剂和荧光物质之间发生相互作用而引起荧光效率降低或激发态寿命缩短，导致强度降低。 1）.荧光猝灭 （1）荧光偏振现象及用途 一旦用偏振光照射，从许多样品出射的光也是偏振的。当样品