第二章 肿瘤分子生物学与细胞生物学.pptVIP

（4）CKI对CDK的抑制 CKI有两大类蛋白组成 Ink4家族：P16INK4a、P15INK4b、P18INK4c和P19INK4d，抑制CDK4、CDK6。 Cip/Kip家族：p21Cipl、P27Kip1和P57Kip1，抑制CDK2、CDK4、CDK6等。 2. 细胞周期调控异常与肿瘤 （1）细胞周期的驱动机制 （2）细胞周期的监控机制 （3）细胞周期在肿瘤中的含义 （1）驱动机制G1-S期 DNA的复制及蛋白质的合成做准备， 产生了cGMP、cAMP、RNA、多胺、胸苷激酶及脱氧核苷酸等物质。 G1期限制点（restriction point ，R点） 哺乳动物细胞体外培养时，需要添加多肽生长因子促进细胞的分裂。如果缺少生长因子, 就会被阻止在G0阶段, 一旦在培养基中添加了生长因子, 这些细胞在14～16小时后通过细胞周期限制点, 再过6～8小时, 细胞进入S期, 并完成余下的细胞周期过程。 若将通过限制点的细胞从含有生长因子的培养基转移到没有生长因子的培养基上, 这些细胞不能进入S期。但是, 细胞一旦通过了G1期的限制点, 这些细胞就能够进入S期并完成其后的细胞周期过程。由此推测, 哺乳动物细胞周期的限制点相当于酵母的START点。 G1-S transition：Rb protein G2-M期 cyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化：如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件。 （2）细胞周期检查点（checkpoint） G1/S检验点:在酵母中称start点，在哺乳动物中称R点(restriction point)，控制细胞由静止状态的G1进入DNA合成期，相关的事件包括：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？ S期检验点：DNA复制是否完成？ G2/M检验点：是决定细胞一分为二的控制点，相关的事件包括：DNA是否损伤？细胞体积是否足够大？ 中-后期检验点（纺锤体组装检验点）：任何一个着丝点没有正确连接到纺锤体上，都会抑制APC的活性，引起细胞周期中断。 Cell cycle checkpoint ATM/ATR（共济失调毛细血管扩张中的突变） 最早发现于毛细血管扩张性共济失调症患者，人类中大约有1%的人是ATM缺失的杂合子，表现出对电离辐射敏感和易患癌症。 ATM编码一个蛋白激酶，结合在损伤的DNA上 （3）细胞周期在肿瘤中的含义 癌细胞的一个特征性表型异常是细胞周期调控失调 正常细胞转化为肿瘤细胞有赖于控制正常细胞周期进程的基因突变，从而导致调节细胞生长信号的失控 驱动机制破坏 监控机制破坏 细胞周期驱动机制的破坏 人们把细胞周期驱动机制比作一辆汽车或引擎，驱使其运行的因素好比“油门”；制动器运行的机制犹如“刹车”。持续地踏住“油门” 或“刹车”失灵，终将失控。细胞进入失控性生长 细胞周期监控机制的破坏 每一完整检测点的四部分中的任何一部分出了问题，都将造成细胞遗传的不稳定性，如 不能发现DNA损伤(ATM基因突变) 细胞周期不能阻滞 (p53突变) DNA修复错误 (MLH1突变) 决定错误(如Bcl-2突变) DNA监控机制的破坏将导致 染色体重排 基因缺失 扩增 易位 纺锤体监控机制的破坏导致 有丝分裂过程中染色体不能分开 子代细胞中染色体丢失或增加（异倍体） 思考题 细胞周期的调控机制 细胞周期的监控机制 肿瘤细胞中细胞周期调控的异常 * * * * * * * * 人类细胞的CDK1是在Thr160, CDK2在Thr161 。 * * 人类细胞的CDK1是在Thr14, CDK2在Tyr15 。 * DNA甲基化的检测方法 甲基化敏感性限制性内切酶 HpaⅡ和MspⅠ均能识别CCGG序列， CmCGG Msp I识别， HpaⅡ不识别 mCmCGG 都不识别 利用HpaⅡ-Msp Ⅰ的这种属性处理DNA，随后进行Southern或PCR扩增分离产物，明确甲基化状态 甲基化特异性PCR(Methylmion Specific PCR，MSP) 首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。 然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行PCR扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。 （6）癌基因缺失 肿瘤细胞中常发现有癌基因DNA片断的缺失，这种既可以是单个碱基对，也可以是一个片断，甚至为整个基因的丢失。 癌基因内小的缺失，在正常情况下为抑癌蛋白活化的部分。 在多形性神经胶质瘤，EGFR基因扩增是常见的晚期事件，但多数病例不仅有基因扩增，而且在扩增的基因内也有缺失