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现代检测技术液相色谱分析技术 高效液相色谱技术 离子色谱技术 色谱法的历史 20世纪初 色谱法诞生 20世纪40年代 建立了色谱基础理论 20世纪50年代 生产第一台商品气相色谱仪 20世纪60年代 高效液相色谱 20世纪70年代 离子色谱诞生 20世纪80年代 毛细管电泳色谱 高效液相色谱法 分 类 液固吸附色谱法 吸附 解吸 液液分配色谱法 溶解 挥发 — 化学键合相色谱法 离子色谱法 离子交换能力 凝胶色谱法 以分子尺寸的差异进行分离 —凝胶过滤色谱 — 凝胶渗透色谱 亲和色谱法 亲合力（用于细胞内容物，培养基或血浆中的纯化核酸、 蛋白，抗体的分离，温度4度吸附，25度洗脱） 化学键合相色谱法 键合相色谱法可分为正相色谱法和反相色谱法。 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 官能团为 －CN氰基、－NH2氨基等。 流动相强度：正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇 色谱柱固定相的影响 色谱柱粒径的影响 溶剂选择及梯度设置 凝胶过滤色谱法（GFC）-尺寸排阻色谱 应用于水溶液中多肽、蛋白质、多糖的分析，测定分子量的分布。 适用于对未知样品的分析，可以很快提供样品分子量大小组成的全面概况，迅速判断样品是简单的还是复杂的混合物，常常是对复杂的未知样品进行分析的关键一步。 高效液相色谱仪 WATERS公司HPLC仪 WATERS公司HPLC仪 Waters高效液相色谱和超高效液相色谱   紫外检测器- 紫外吸收检测器是一种选择性浓度型检测器，仅 对在紫外波长下有吸收的物质响应.灵敏度高、噪生低，应用广（70%） 示差折光检测器- 是一种通用性检测器，只要组分折光率与流动相折光率不同，就能进行检测检测的化合物范围广，特别在尺寸排阻色谱中多用灵敏度低，折光率随环境温度变化大，不能用于梯度洗脱 荧光检测器 －是最灵敏的高效液相色谱检测器，属于选择性浓度型检测器灵敏度比紫外吸收检测器高约2个数量级，特别适合于痕量分析非荧光物质可通过荧光试剂反应变成荧光物质后检测，扩大了检测器应用范围 二极管阵列 一种光学多通道检测器。在晶体硅上紧密排列一系列光电二极管，每一个二极管相当于一个单色器的出口狭缝，二极管越多分辨率越高，一般是一个二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽的单色光。 高效液相色谱法的应用 生物工程中——氨基酸、蛋白质、多肽、核苷酸、核酸 医药研究中——解热镇痛类药物、磺胺类药、抗菌素类 合成药物的纯化质量控制、中草药的分析分离制备提纯、 手性药物的分离分析，约80％的药物可以用HPLC进行分析分离。 食品分析中——食品本身营养成分如糖类、有机酸、维生素、蛋白质、脂肪，食品添加剂如防腐剂、抗氧化剂、合成色素、甜味剂、保鲜化学物质，食品污染物如农药残留、黄曲霉素的分析。 环境工程中——多环芳烃、农药残留、酚类、胺类、阴离子和非离子表面活性剂。 精细化工——脂肪族或芳香族的醇、醛、酮、醚、酸、酯、表面活性剂、聚合物、药物、染料、炸药等化工产品   离子色谱技术 离子色谱法作为高效液相色谱的一个分支，在无机阴离子分析方面占有很大优势。 离子色谱的分类 离子交换色谱(HPIC)－离子交换 离子排斥色谱(HPICE)－离子排斥 离子对色谱(MPIC)－吸附和离子对的形成 柱填料多为苯乙烯－二乙烯基苯的共聚物 固定相是离子交换树脂 离子交换树脂又分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。 用于有机无机阴离子分离的阴离子交换树脂的功能基为季胺基 用于阳离子分离的阳离子交换树脂的功能基为磺酸基和羧酸基。 抑制电导的基本原理 离子排斥色谱 分离机理包括Donnan排斥，空间排阻、 吸附 固定相为高容量的总体磺化的苯乙烯－二乙烯基苯的共聚物 用于有机酸、无机弱酸和醇类的分离 强酸不被保留 离子对色谱 固定相是弱极性和高