胆固醇测定2.ppt

* * 实验项目 血清胆固醇的测定-CHO 2学时 血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化，肾 病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病。 其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮 癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶血 性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降低， 其他如感染和营养不良等情况。 临床意义 【参考值】：3.10mmol/L～5.70mmol/L 一、实验目的 掌握：血清胆固醇测定的原理、操作方法和临床意义。 二、实验原理 2、 3、 4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比， 用72-1型分光光度计分别测定标准管和测定管的吸光度值， 计算胆固醇的含量。 1、 三、实验器材与试剂 （1）试管 3支 （2）水浴箱 1台 （3）试管架 1个 （4）洗耳球 1个 （5）微量五档可调移液器 2支 （6）刻度吸量管（5ml） 1支 （7）72-1型分光光度计 1台 （一）实验器材 微量五档可调移液器 使用方法： 1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动，以保证密封。 2.使用前应先将移液器吸液和排液几次，润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。 3.选择量程。 4.垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，然后把吸嘴浸入到液面下2～3mm，再缓慢放松按钮，使之复位，等待1～2秒后，从液体中取出，并避免碰撞任何物体。 5.将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢地把按钮按到第一停止点，等待1～2秒，再把按钮全部按下去，排尽液体后，吸液嘴应沿容器壁上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成。 6.最后，打掉用过的吸液嘴，调回最大量程，仪器放置好保存。 72-1型分光光度计 工作原理 物质对光的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收波长。在一定波长下，某物质的溶液对光的吸收强弱（吸光度A）与溶液的浓度C和液层的厚度L的乘积成正比，即遵循朗伯-比尔定律： A=K·C·L (K为吸收系数，对同一物质来说为一常数) 使用方法： 1.检查 ：指针位于“0”。 2.打开电源，打开比色皿暗箱盖，预热20分钟。 3.加样：夹毛面，擦干。 4.放置好比色皿，选择波长、调灵敏度。 5.反复调0、调100至稳定。 6.合盖，读数，记录，取样，清洗，关闭仪器。 1、血清（样本） 2、工作液 3、胆固醇标准液（标本）：5.17 mmol/L （二）实验试剂 四、实验内容和操作过程 1. 取2支干燥试管，分别标明测定管（T）、标准管（S） 然后按下表加入试剂： 加入物 测定管T 标准管S 血清（ml） 15 标准液（ml） 15 工作液（ml） 1.5 1.5 2、将样品混匀后，置于37℃水浴箱中水浴 10min。 3、用分光光度计在波长510nm处，以空白管O调零，分别读取两管吸光度值，记录测定管T、标准管S的吸光度值AT、AS 。