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乙肝病毒大蛋白研究---HBV large surface protein-----北京地坛医院 魏红山教授 病毒血清学检测指标 直接指标：外膜蛋白(表面抗原）、降解或代谢产物蛋白、病毒核酸DNA或RNA 间接指标：各种抗体IgG、IgM等 目前乙肝实验血清学检测的需要 目前临床乙肝病毒检测的缺陷 １、HBeAg阴性肝炎(小三阳肝炎)的血清学诊断指标缺乏 过去认为大三阳转小三阳即HBeAg的阴转意味着乙肝病毒复制降低，传染性减弱，但是近年国内外的研究发现部分小三阳在血清转化（或变异）后病毒仍然复制，而且预后更严重。 但是目前没有血清免疫学指标可以检测小三阳病毒携带者是否病毒复制！ ２、药物治疗效果评价血清学指标缺乏 由于HBsAg非常难转阴，而HBV DNA转阴停药容易反弹，抗病毒治疗缺乏终点指标！ 抗病毒治疗效果监测 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当，此时停药病情易反复。 小三阳两种预后 抗病毒治疗过程中病毒颗粒消退顺序 抗病毒治疗效果监测 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当，此时停药病情易反复。 没有指标预示治疗终点 期望HBsAg转阴，带来过高期待，导致过度用药，增加患者负担以及浪费资源；据估计每年20-40％左右的治疗是“多余”的。 ＤＮＡ阴转就停药，导致过早停药，引起病情反弹 寻找比外周血DNA检测更合适的指标 大部分人熟悉的“乙肝两对半”检测，其实并非乙肝病毒的传染物质和致病物，乙肝两对半”只能反映一个人是否感染过乙肝，却不能直接深入地揭示乙肝病毒在人体内的复制和致病情况，也就不能更好地指导临床用药和制订治疗方案。 有效的办法──乙肝病毒DNA定量试验，但是外周血中DNA阴转已经不能作为治疗终点 还有比DNA更好的标志物吗 HBeAg阴性活动期肝炎 HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现状： (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度； (2) 缺乏指导合理治疗的指标； (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展； (4) 临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的血清学指标。  解决方案 通过研制针对复杂构象结构的大蛋白的单抗直接检测大蛋白反式激活域 大蛋白是外周血中唯一可以检测的病毒反式激活因子 大蛋白与肝内病毒复制密切相关，和病情反弹密切相关，是抗病毒治疗的辅助终点指标 大蛋白检测可以弥补目前项目的不足 -----检测Dane颗粒、管状病毒颗粒 大蛋白与肝内病毒复制（不是外周血）密切相关 用于e抗原检测的补充 大蛋白晚于血液内ＤＮＡ消退，早于HBsAg消退 大蛋白直接导致肝细胞损伤，直接毒性作用 大蛋白具有反式激活增强病毒复制作用 HBV-LHBs临床使用的意义 -----e抗原的补充 １、 病毒携带者体内病毒复制的确切血清学指标，特别是e抗原变异或转化后可作为e抗原的补充。 2、 大蛋白具有反式激活病毒复制的能力，大蛋白存在与否可预测病情反弹，大蛋白转阴是病毒清除的最早迹象，可以作为抗病毒治疗终点辅助指标。 乙肝病毒包膜蛋白研究进展 1995-2004年 发现大蛋白前S区有复杂构象结构，是被发现具有拓扑结构的第一个病毒外膜蛋白 1996－９８年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用 2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大蛋白（致病性蛋白） 2003年Nature发表文章总结其反式激活机理 2004年 国际上进行大蛋白特殊拓扑结构研究 2004年 成功构建针对构象型表位的单克隆抗体 反式激活蛋白 在同一条核酸链上起调控基因表达作用的核酸序列称为顺式作用元件； 反式激活（transactivation）,既某一基因的编码蛋白转而激活同一基因的远离部位，或另一基因的转录和表达。研究发现乙肝病毒的一些组成蛋白具有反式激活作用。 大蛋白试剂临床研究 浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测 HBV－LP可以作为一个评估抗病毒治疗效果以及判定治疗终点的指标，能够合理的指导患者的用药，避免过早停药导致的病情反复。 * 状况：指标不少，但是缺少以下关键指标 1,什么是e-CHB肝炎（e抗原阴性肝炎）血清学指标？ ２、抗病毒治疗没有实验室终点指标，临床肝炎治疗合理用药指导，避免过度用药．特别是ＤＮＡ阴性后应该持续多长时间用药？ 病毒休眠\不复制\预后好 病毒保持复制水平\肝硬化\肝癌 什么指标能够分辨开? 最先消失 其次消失 最后消失 DNA 阳性 大蛋白阳性 DNA阴性 大蛋白阳性 D