生物工程下游技术课件.ppt

一、生物分离工程概念 是指从发酵液、酶反应液和动植物细胞培养液中分离纯化生物产品的过程。 它描述的是生物产品分离、纯化过程的原理、方法和设备。它处于整个生物产品生产的后端，所以也称生物工程下游技术。 二、生物分离工程研究的内容 1、主要目标产品的类型 2、生物分离工程技术的探讨 3、设备的研究 4、生物分离操作过程的设计与优 化 三、生物分离的一般流程 1.发酵液的预处理 主要操作单元是过滤和离心 2.产物的提取 主要操作单元是沉淀、萃取、吸附和超滤 3.产物的精制 主要操作单元是色谱技术 4.成品的加工处理 主要操作单元是浓缩、结晶和干燥 4、生物分离工程的选择准则 ① 生产成本要降低 ② 工艺步骤要少 ③ 操作程序要合理 ④ 适应产品的技术规格 ⑤ 生产要有规模 ⑥ 产品具有稳定性 ⑦ 环保和安全要求 ⑧ 生产方式 第二章 发酵液的预处理 为何要对发酵液进行预处理？ 一、发酵液的基本特性 发酵产物浓度较低，大多为1-10%， 悬浮物颗粒小，细胞的相对密度与培养液相似。 可压缩性 液相粘度大，大多为非牛顿型流体； 悬浮状态稳定：双电层、水化膜、布朗运动 --这些特性使得发酵液的过滤与分离相当困难。 二、预处理的目的和要求 预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率： ⑴改变发酵液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度。 ⑵ 相对纯化，去除发酵液中的部分杂质（高价无机离子和杂蛋白质），以利于后续各步操作。 ⑶尽可能使产物转入便于后处理的一相中（多数是液相） 三、预处理的方法 凝聚和絮凝 加热法 加水稀释法 调节悬浮液的PH值 加入助滤剂法 加吸附剂和加盐法 高价无机离子的去处 可溶性杂蛋白的去除 色素及其他杂质的去除 通过对发酵液进行适当的预 处理，即可改善其流体性能，降低滤饼比阻，提高过滤与分离的速率。 助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。如：硅藻土、纤维素、石棉粉、珍珠岩、白土、炭粒、淀粉等。 凝聚和絮凝 凝聚和絮凝是两种方法，两个概念。 凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１ mm 大小块状凝聚体的过程。 絮凝：指使用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。 二 预处理-加热 加热使蛋白质变性凝固 变性蛋白质的溶解度小。如柠檬酸发酵液加热至80℃以上，可使蛋白质变性凝固，过滤速度加快。 加热处理只适用于对热较稳定的液体。注意加热温度与时间，不影响产物活性和细胞的完整性。 三 预处理-调节pH pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。 细胞(碎片)及某些胶体物质在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。 调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。大幅度改变pH还能使蛋白质变性凝固。 通过调整pH值改变膜过滤中易吸附分子的电荷性质，可减少膜堵塞和污染； 影响离子型絮凝剂的电离度。 四 加入助滤剂 一种不可压缩的多孔微粒， 在发酵液中加入固体助滤剂，则菌体 可吸附于助滤剂微粒上，助滤剂就作为胶体粒子的载体，均匀地分布于滤饼层中，降低了滤饼的可压缩性，减小了过滤阻力。 目前生物工业中常用的助滤剂是硅藻土，其次是珍珠岩粉、活性炭、石英砂、石棉粉、纤维素、白土等。 五. 加吸附剂和加盐法 加入某些不影响目标产物的反应剂，可消除发酵液中的一些杂质对过滤的影响，从而提高过滤速度。 1）加入吸附剂与某些可溶性盐类发生反应生成不溶性沉淀,生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，又能使蛋白质凝固，过滤性能上升，沉淀本身可作为助滤剂.如在新生霉素发酵液中加入CaCl2和Na3PO4，生成Ca3(PO4)2沉淀。 2）发酵液中含有不溶性多糖物质时，用酶将其转化为单糖，以提高过滤速率。如万古霉素用淀粉作培养基，发酵液过滤前加入0.025%的淀粉酶，搅拌30min后，再加2.5%硅藻土助滤剂，可提高过滤效率5倍 高价无机离子的去除方法 Ca2+ ——草酸、草酸钠，→形成草酸钙沉淀（注意回收草酸） ； Mg2+——三聚磷酸钠，→形成三聚磷酸钠镁可溶性络合物； Fe2+ ——黄血盐，→普鲁士兰沉淀 杂蛋白的去除方法 (1) 沉淀法：蛋白质是两性物质，在酸性溶液中，能与一些阴离子（三氯乙酸盐、水扬酸盐）形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子（Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+等）形成沉淀。 (2) 变性法：使蛋白质变性的方法很多，如：加热，调节PH，有机溶剂，表面活性