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第二章 质粒和噬菌体 内容： 质粒 质粒的基本特征 质粒的分类 噬菌体 噬菌体的基本特征 λ噬菌体 M13噬菌体 1. 质粒 1.1 概念： 存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状的双链DNA分子。并不是细菌生长所必需的，但可以赋予细菌某些抵御外界环境因素不利影响的能力。 1. 质粒 1.2 质粒的基本特征 自主复制性 可扩增性 严紧型(Stringent) 松弛型(Relaxed) 可转移性(穿梭载体Shuttle vector） 不相容性 Conjugation: 接合 Compatibility：相容性 Incompatibility: 不相容性 1. 质粒 1.3 质粒的大小 表2-1 代表性质粒的大小 1.4 质粒 Fertility /F质粒：含有tra基因，促进接合转移。 Resistance / R质粒：含有氯霉素、青霉素或水银抗性基因。如RP4，发现于假单胞杆菌。 Col 质粒：如存在于E. coli 中的CoE1。 降解质粒（Degradative plasmids） 致瘤质粒（Virulence plasmids）农杆菌Ti质粒 1. 质粒 1.5 细菌之外的质粒 酵母中发现了2μm的环状质粒。 其他真核生物中尚未发现质粒存在。 2. 噬菌体 2. 噬菌体 2.2 λ 双链噬菌体DNA载体 λ DNA分子的基因组织 λ DNA全长49kb。 λ遗传图谱的特点: 相同功能基因在基因组中聚集在一起。这使他们一起启动或关闭，而不是单独起作用。 2.噬菌体λ DNA分子的基因组织 The λ genetic map showing the positions of the important genes and the functions of the gene clusters. 2. 噬菌体 λ DNA 的线状和环状形式 在噬菌体头部，λ 以双链线状存在，但在分子的两端各含12个核苷酸的突起GGGCGGCGACCT, CCCGCCGCTGGA，这两端的单链片段是互补的，可以通过碱基互补配对形成环状分子，完整的双链分子。 λ的粘端称为cos (Cohensive end site)位点 。 cos位点的两个作用： 使进入细菌的DNA分子成为环状 ，这是插入细菌基因组的先决条件。 作为识别位点，由内切酶将原噬菌体从细菌基因组切下来 。 2 噬菌体 2.3 M13单链噬菌体DNA载体 M13的结构 M13是一个线状噬菌体，其分子仅有6407kb，分子是单链环状的。 M13含有的基因数目也少，M13的头部装配仅需要3种不同的蛋白，15个蛋白分子。 M13的侵染周期很短，不需要插入寄主的基因组。M13通过细菌的纤毛插入大肠杆菌，单链分子作为模板合成互补链，形成双链DNA分子。 2.3 M13单链噬菌体DNA载体 细菌细胞每分裂一次，大约可以释放1000个新的病毒颗粒。 2.3 M13单链噬菌体DNA载体 M13作为克隆载体的理由： 基因组小于10kb 复制的双链形式类似于质粒载体 利用M13作载体可以获得单链的DNA。 3 病毒作为其它生物的载体 大部分生物都能被病毒侵染。 动物细胞中病毒广泛作为基因克隆的载体： 猿猴病毒simian virus 40(SV40) adenoviruses(腺病毒) 昆虫病毒baculovirus(杆状病毒) 植物中可利用的载体较少。 The end! Thanks! * * 图1. 抗生素作为质粒的选择性 标记基因 纤毛 Agrobacterium tumefaciens 213 pTiAch5 Pseudomonas putida 117 TOL E. Coli 95 F Pseudomonas 54 RP4 E. Coli 6.4 Col E1 E. Coli 2.1 pUC8 来源 大小/kb(千碱基对) 质粒 2. 噬菌体 2.1噬菌体的特点 Structure Infection process 2.噬菌体 λ噬菌体的侵染循环 The lysogenic infection cycle of bacteriophage λ Control integration Control gene expression Control coat protein 2.3 M13单链噬菌体DNA载体 *