实验5 琼脂糖凝胶电泳课件.pptVIP

琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 一 实验目的 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 检测水稻总DNA的纯度与分子量 检测PCR的结果 二 实验原理 电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃ 开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度 DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动 二 实验原理 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系 可依据DNA分子的大小使其分离 二 实验原理 Goodview可与DNA分子形成复合物，发射的荧光强度较游离的Goodview强度大10倍以上，且荧光强度与DAN含量成正比 示踪染料和分子量标准参照物 三 实验材料、用具及试剂 提取的水稻总DNA和PCR产物 电泳仪，电泳槽，电子水平，移液器，枪头，三角瓶、点样板，微波炉等 琼脂糖，TAE电泳缓冲液， Goodview，载样缓冲液（Loading buffer） 四、实验步骤 1 制胶： 100ml(0.5×TAE)+0.8g琼脂糖 三角瓶(1/3) 煮胶 溶解，冷却至60℃(不烫手)，加Goodvi