【中山大学生物防治】09微生物生产和害虫生物防治.pptx

第九章 昆虫病原微生物的增殖和生产苏云金芽孢杆菌的生产白僵菌的生产斜纹夜蛾多角体病毒的增殖昆虫病院线虫的繁殖与培养蝗虫微孢子虫的繁殖农用抗生素的生产一、苏云金芽孢杆菌的生产生产方式优 点缺 点固体发酵（1）培养基含水量少、废水废渣少、环境污染小、能耗低、设备技术较简易、投资低、产物浓度高；（2）发酵后可直接进行干燥、粉碎，过程简单，后处理过程节能。发酵温度、湿度难控制，自动化程度低，易染杂菌、产品湿润性能较差。液体深层次发酵（1）生产规模大，流动性好，有利于传质、传热、和控制；（2）便于高效、自动化、清洁生产。发酵后处理较难，发酵水平受培养基组分和浓度因素的影响。（一）固体发酵（1）生产工艺流程1. 三级扩大培养沙土管菌种→斜面菌种→液体种子扩大种子培养→半固体浅盘培养→干燥→粉碎包装苏云金芽孢杆菌菌体（2）工艺条件种子扩大培养多采用三角瓶液体震荡培养。半固体浅盘发酵相当于发酵罐培养，培养基可因地制宜利用农副产品，如一种以麸皮为主要基质的培养基，其质量比为：麸皮50、豆饼粉25、麦秆粉20、CaCO3 1.5、KH2PO4 0.3、MgSO4 0.2、NaOH 1、水150。料厚1.6~3.3 cm，接种后盖灭菌纱布。室温25~30oC。培养过程中反动数次，2~3 d后大部分形成芽孢囊，并有20%左右的芽孢和晶体脱落时终止培养。连同麸皮培养基磨碎过筛包装。产品含活孢子50亿~100亿/g。2. 一步扩大培养采用半固体浅盘发酵，以工业生产的菌粉作为种子，省略了三级扩大培养法中的斜面菌种和种子扩大培养两个步骤。将经灭菌处理过的半固体培养基倒在消毒过的塑料薄膜上，用质量高的工业菌粉（含活芽孢100亿/g）按配料干重的1%抢温（80oC）接种，拌匀后用塑料薄膜包起闷热10 m，以达到减少杂菌和催芽的目的。然后打开塑料膜摊放在浅盘上培养。其他步骤与三级扩大培养法相同。（二）深层固体发酵斜面菌种沙土管菌种29~31oC，斜面培养92~100 h1. 生产工艺流程发酵罐29~31oC，压力0.05~0.07 mPa；通气1:0.8~1.2(v/v) 20~40 h发酵液预处理加硅藻土混合、搅拌30~45 min板框过滤用HCl调pH至4.5~5.5加填充料混合沸腾干燥低含量（约10 000 IU/mg）Bt半成品用HCl调pH至4.8~5.5压力≦0.6 Mpa去水浓缩1.5~2倍膜浓缩加填充料混合加轻质碳酸钙，混合、搅拌30~45 min喷雾干燥进风170~210oC，出风80~90oC，喷粉450~550 L/h高含量Bt半成品2. 工艺条件菌种：选用优良菌种，并防止退化，用时移接活化，选择对数生长期接种，接种量要适当。发酵培养及下游处理控制：接种和发酵过程应注意不能有杂菌和噬菌体感染。通气培养的适温为30oC，不能低于28oC或高于35oC。pH在发酵时稍降，形成芽孢时稍升。晶体脱落即可放罐。如果用离心沉淀收获或发酵直接真空干燥，应尽可能提高菌体成熟度。如果用板框过滤法，滤液中菌数应低于0.2亿/mL。喷雾塔进口温度170~210oC，中层温度65~75oC，流量450~550 L/h。工业生产发酵培养基：我国常用的培养基成分（质量比）为：花生饼粉2.0，玉米浆0.9、糊精0.8、蛋白胨0.1、CaCO3 0.2,、MgSO4 0.075、K2HPO4 0.007、(NH4)2SO4 0.2、饴糖0.5、消泡剂豆油0.2。我国菌剂产品一般约含活芽孢数100亿/g。二、白僵菌的生产白僵菌和绿僵菌是昆虫病原真菌中大量生产研究较多的种类，生产方法有很多共同之处。白僵菌致死的昆虫绿僵菌致死的昆虫菌种发酵1. 白僵菌液体深层发酵工业斜面菌种活化黄浆水（豆腐压榨水）原料二级液体种子（查贝克培养基+1.5%蛋白胨）（26~28oC，72 h）豆油去泡剂，按0.2%加入18 mol/L H2SO4调至pH 2空气过滤器空压机发酵罐深层培养NH4OH调至pH 5（26~28oC，约72 h，搅拌速度200 rpm）常压水解发酵液填充剂（滑石粉，过筛孔径46.2 μm，按5%加入）沉淀板框过滤或连续离心（20 000 rpm）弃去常温干燥调浆生产、储藏喷雾干燥粉碎液体深层发酵工业生产工艺流程检验低温储藏包装成品（芽生孢子，450亿/g）早在1960年代，我国和前苏联就曾研究过白僵菌的液体深层发酵工业生产。Samsinakova (1966)在1 000 mL的发酵液中可获得10~15 g干重的芽生孢子。1970年代，前苏联还有通过深层发酵直接生产白僵菌分生孢子的报道（Goral, 1973, 1975），发酵罐中可获得5×108~2×109分生孢子/mL，取决于培养基的成分和发酵条件的控制。Rombach （1989）进一步研究了