植物营养研究法6章其它研究法课件.pptVIP

第六章 植物营养的其它研究方法 第一节 植物营养的土壤酶学研究法 二．土壤酶 （二）土壤酶来源 （四）土壤酶研究的应用 三．土壤酶的研究方法 （二）土壤样品微生物的纯化 （三）酶作用基质与酶促反应环境 （四）对照的设置 （五）酶活性表示方法 第二节 植物营养诊断方法 （二）化学诊断 1．植物组织速测诊断 2．叶片分析诊断： （三）施肥诊断 （四）酶学诊断 （五）其它诊断方法 三．植物营养诊断的程度 植物根养分离子吸收动力学研究方法 * 一．酶的概念及类型 酶：具有专性催化作用的蛋白质，活的生物体合成 类型——国际酶学委员会分类 1．氧化还原酶类 2．转移酶类 3．水解酶类 4．裂解酶类 5．异构酶类 6．连接酶类 （一）土壤酶的种类 目前已知的存在于生物体中的近2000种酶类中，约有50余处累积于土壤中。 研究最多的是：氧化还原酶类、水解酶类 研究较少的是：转移酶类、裂解酶类 不曾涉及的是：异构酶、连接酶 微生物产生的胞外酶 植物根系溢泌的酶 土壤动物溢泌的酶 （三）存在部位 胞外酶：土壤溶液、土壤固体、 土 壤有机体吸附 土壤胞内酶：微生物、根、动物中 1．评价土壤肥力水平和供肥能力 土壤潜在肥力——酶活性）——植物有效养分三者关系密切。 土壤肥力主要物质基础——土壤有机质，是土壤酶底物的主要给源。 2．诊断植物营养元素丰缺 土壤缺P——磷酸酶活性高 土壤施P——磷酸酶活性低 3．鉴别土壤类型 1964年俄国科学家用脱氢酶鉴别钙质土，得出酶活性顺序为：黑钙土栗钙土棕钙土。 4．净化土壤、减轻危害：氰氨化钙形成氰酸铵的分解——氰基酶；农药残留物 控制脲酶，减少NO3、NO2积累。 5．调控土壤酶活性，提高肥料利用率：脲酶活性——尿素分解快则氨挥发，慢则尿素淋失。 1．土样采集：代表性，根际内外酶活性不同 2．土样贮藏：一般认为：新鲜土样酶活性大于风干样；土样一经风干，再延长存放时间，酶活性失活较小；恒温贮藏（4度）或冻藏（-5度——-40度）酶活性失活较小，冷冻最好；田间湿度条件下贮藏样品，酶活性更能反映实际。 3．土样称量：一般1-5克，酶活低的10克。酶反应速度随土样称量呈现线性增加，过少测定不准确。 　　使土壤酶活性与微生物活性区分开来。 理想方法是：有效抑制微生物增殖生长和生理过程，不破坏微生物的细胞，防止酶渗出，也不破坏土壤理化性质，常用以下两种途径： 1．化学灭菌剂：常用适当浓度的甲苯，其作用为抑制微生物增殖，导致某些微生物质壁分离或胞溶，也可能引起某些酶活性升高或降低。 　　甲苯的适当浓度，土样重的20%，土壤悬浮液体积的5-10% 其它灭菌剂：乙烯氧化物、苯、丙酮、醚、氯仿等。 2．高能电离辐射：X射线或r射线，使微生物失去增殖能力，土壤理化性质改变甚微，土壤酶活性影响较小，是一种较好的灭菌法，但需特殊设备，代价较高。 1．基质：酶活性是用酶促基质转化的数量或产物的数量来表示 　种类：选择一种酶作用的底物，标准方法中每次测定选用同一底物，以便比较。 　加入基质以保证酶促反应期间基质转化速度保持恒定为准， 　即反应结束时基质有一定剩余，但不能太多 2．酶促反应环境：环境条件影响酶活性，为使测得酶活性最大，须使环境条件最适。 （1）各种酶要求的pH条件不同，选择适宜pH缓冲体系。 （2）温度：目前一般采用30-37度。一定温度范围内酶反应速度随温度升高而加快，超过一定温度，酶活性减弱或变性。 （3）培养时间：一般几小时到几昼夜。 原则：反应时间内酶种反应速度恒定 过长：基质浓度下降，产物增加，酶本身变化 过短：基质反应量少而无法测定。 中国农科院：测定土壤蔗糖酶等一般以24小时为宜 1．无酶对照：目的是校正土壤非酶促反应造成的影响，土壤中某些可变价阳离子（Fe、Cu、Mn）可能引起无机催化剂的作用，尤其是氧化还原酶测定中。 方法：干热处理：180度2-3小时 湿热处理：2atm蒸煮1小时 化学处理：化学抑制剂如重金属盐、氰化物等。 2．无基质对照：消除土壤中本来存在的与基质或产物类似物质的影响。 3．无土对照：消除基质自身分解的影响。 　　通常：单位时间单位土重，一定温度下酶促反应产物数量。 一．养分供应量与产量关系 二．植物营养诊断的主要方法 （一）形态诊断：缺素时，形态上：失绿、色斑、坏死、畸形等。 老叶、新叶、顶叶 叶缘、叶肉、叶脉 株高、叶片大小、根系大小 分析植物、土壤的元素含量与事先经过试验研究拟定的临界含量比较，或者以异常的与正常的直接进行比较而作出丰缺判断。 比较：对植物而言，一般说，植物分析结果对作物营养状况的反映是最直接的，所以是判断营养丰缺的最可靠依据。 　对土壤分析：土壤分