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人源M2三联体靶抗原BPO 作者:周晔，姚定康，陈燕，蒋天舒，蒋廷旺，吴传勇，陈波，邓安梅 ［摘要］ 目的 用基因工程的方法克隆表达抗线粒体抗体二亚型的3个靶抗原侧链二氧酸脱氢酶复合体E2、丙酮酸脱氢酶复合体E2、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2及其连接形成的三联体BPO-E2融合蛋白，以用于人原发性胆汁性肝硬化的早期发现和临床诊断。方法 针对BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2的cDNA序列设计引物，从正常人的淋巴细胞中提取RNA，通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段，经测定序列验证后插入表达载体pET28a，构建重组表达载体pET28a-PDC-E2、pET28a-OGDC-E2、pET28a-BPO-E2，转化大肠杆菌BL21后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS、Western-blot等鉴定。结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明，成功地构建了4种重组质粒。IPTG诱导表达后，获得4种融合蛋白。经免疫学鉴定，重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论 重组表达的融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断。 ［关键词］ 肝硬化，胆汁性；自身抗原；重组融合蛋白质类 cDNA cloning and expression of au