第十四章 DNA的复制与修复课件.ppt

复制子: 受同一个复制起始区控制的DNA被称为复制子（replicon），它是复制的功能单位。 原核细胞DNA复制只有一个复制起始区，因此它只有一个复制子。通常细菌、病毒和线粒体的DNA分子都是作为单个复制子完成复制的。 真核生物：有很多复制起点，复制方向也是双向。真核细胞的细胞核DNA复制有多个复制起始区，因此它包含多个复制子。 起点 起点 + 复制眼 在复制的起始点处，DNA双链部分解开为单链，形成叉子形状称复制叉（replication fork）。 大多数生物DNA的复制是双向的，但也有例外，如滚环式复制（rolling circle replication）。 2. DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication） 所有已知的DNA聚合酶的合成方向都是5′→3′。1968年日本学者Okazaki冈崎提出了DNA的不连续复制模型，他认为3′→5′走向的DNA链的合成是不连续的，是由许多5′→3′方向合成的DNA片段连接起来的，这些不连续的DNA片段称为冈崎片段（Okazaki fragment）。原核细胞冈崎片段的长度为1000～2000个核苷酸，相当于1个顺反子（cistron）的大小，即基因的大小；真核生物冈崎片段的长度为100～200个核苷酸，相当于1个核小体DNA的大小。 3′→5′走向的DNA链是不连续的，另一条链根据最近的实验，认为5′→3′走向的DNA链是连续的，因此称semidis continuous replication。 在DNA复制时，以3′→5′方向为模板合成的一条新链是连续的,称前导链（leading strand），它的延伸方向与复制叉的移动方向相同。另一条新链的合成是不连续的，由许多5′→3′方向的冈崎片段组成，这条新链称后随链（lagging strand），它的延伸方向与复制叉的移动方向相反。 DNA聚合酶不能“从无到有”地合成多核苷酸链，只能从已有的多核苷酸链上延长，这个已有的多核苷酸链就是引物，所以DNA的合成必须要有引物，体内的引物多数情况下是RNA，但也可利用体内原有的DNA片段。 RNA引物是以单链DNA为模板，沿5′→3′方向合成小分子RNA引物，在大肠杆菌中RNA引物（RNA primer）由引发酶（primase）催化，引物的长度1～60个核苷酸（引物的长度取决于物种）。 3. DNA的合成需要以RNA为引物: 合成RNA引物的过程称引发，引发是一个十分复杂的过程。 Preprimosome预引发体或称前引发体 4. 引发 primosome引发体 priming引发 （a）大约20个DnaA蛋白各带1个ATP结合到4个9bp的重复序列上，DNA缠绕在上面，形成起始复合物（initial complex）。 （b）HU蛋白是类组蛋白，可与DNA结合，促进起始，受其影响，邻近的三个13bp重复序列被变性成开链复合物（open complex），即解链而形成－小段单链，所需能量有ATP供给。 （c）DnaB（解链酶）在Dnac的帮助下结合于解链区，DnaB借助水解ATP产生的能量，沿DNA链5′→3′方向移动，解开DNA的双链，此时称为prepriming complex，i.e.preprimosome，再与引发酶（primase）组装成引发体（primosome），才能起引发作用。 5. DNA复制叉的结构和链的延长 DNA复制时，DNA双螺旋的解开靠helicase（解螺旋酶）、SS-B 、 Top II（i.e DNA gyrase), RNA引物合成后，DNA pol III与复制叉结合，形成复制体（replisome）的结构，而启动DNA的合成。 replisome：为大的多分子复合物，由DNA pol III以及其他酶和蛋白质组成，组装于细菌染色体的复制叉，并在DNA复制中完成各种各样的反应。 复制起点解开后形成2个复制叉，进行双向复制，前导链和后随链的合成都需要RNA引物，前导链先由引发酶在起点处合成一段RNA引物，随后DNA pol III即在引物上加脱氧核苷酸。前导链的合成与复制叉的移动保持同步。 后随链的合成是分段进行的，需要不断合成冈崎片段的RNA引物，然后由DNA pol III加入脱氧核苷酸。 后随链的合成比较复杂，由于DNA的两条互补链方向相反，为使后随链能与前导链被同一个DNA pol III不对称二聚体所合成，后随链必须绕成一个环状（loop）。 合成冈崎