顺铂预处理对CIK杀伤非霍奇金淋巴瘤细胞的影响.docVIP

顺铂预处理对CIK杀伤非霍奇金淋巴瘤细胞的影响 　　[摘要] 目的 探讨顺铂（DDP）预处理对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）杀伤非霍奇金淋巴瘤细胞的影响。 方法 体外培养人类NHL细胞株Namalwa（Burkitt淋巴瘤细胞株）、SU―DHL-4（弥漫大B淋巴瘤细胞株）及CIK细胞，采用CFSE/PI双标法检测DDP预处理不同浓度、不同时间，CIK对非霍奇金淋巴瘤细胞的杀伤活性影响。应用SPSS 19.0统计学软件对数据进行统计学分析。 结果 体外诱导获得CIK细胞，随着DDP预处理浓度的增加，CIK细胞杀伤淋巴瘤细胞的活性随之增强，随着DDP预处理时间的延长，CIK细胞杀伤淋巴瘤细胞的活性亦增强。 结论 DDP预处理淋巴瘤细胞后，CIK杀伤淋巴瘤细胞活性增强。 　　[关键词] 顺铂；细胞因子诱导的杀伤细胞；非霍奇金淋巴瘤；杀伤活性 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（a）-0012-03 　　非霍奇金淋巴瘤作为一种恶性肿瘤日益危害着人类的健康，如何治疗和提高治疗效果成为临床医务工作者的研究关键。大量的临床和临床前期研究表明顺铂（cis-platinum-diamino-dichloride，DDP）和细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine - induced killer，CIK）具有显著的抗肿瘤作用[1-2]，且治疗非霍奇金淋巴瘤具有良好效果[3]。DDP预处理可以增强CIK细胞对部分癌细胞的杀伤作用[4-6]。本文研究目的主要是通过细胞体外培养的方法研究经顺铂预处理后，是否可以增强CIK细胞杀伤淋巴瘤细胞的杀伤活性，为临床应用化疗联合CIK细胞治疗非霍奇金淋巴瘤提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　DDP购自齐鲁制药（海南）有限公司（批号：A1A1212052）；重组人白介素-2（IL-2）购自山东泉港药业有限公司（批号：201207003）；γ干扰素（IFN-γ）购自上海凯茂生物有限公司（批号；抗CD3单克隆抗体购自Bioscience公司（批号：E06304-1633）；CellTraceTM CFSE Cell Proliferation Kit（C34554）购自Invitrogen公司（批号：1255942）；碘化丙啶（PI）购自碧云天生物技术研究所（编号ST511）；RPMI1640购自GIBCO公司（批号：1161726）；胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司（批号：121122）；淋巴细胞分离液购自MP公司（批号：V0711A）；流式细胞仪为美国BD产品。 　　1.2 实验细胞 　　人类非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa（Burkitt淋巴瘤细胞株）、SU-DHL-4（弥漫大B淋巴瘤细胞株）均购自上海交通大学医学院附属仁济医院白血病研究室。实验细胞株于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养，每3天传代1次，取对数生长期细胞进行实验。 　　1.3 CIK细胞体外培养 　　抽取健康人外周血50 mL，使用密度梯度离心方法分离外周血取得单个核细胞，把细胞浓度调整为1×106/mL进行后续培养，第1天加入IFN-γ 1000 U/mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度条件下培养24 h，然后分别加入重组人白介素-1（IL-1）100 U/mL、重组人IL-2（IL-2）500 U/mL、抗CD3单克隆抗体50 ng/mL，在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中进行培养。以后每3天半量更换新鲜培养液，并补加重组人IL-2，细胞密度调整至1×106/mL，培养期间用流式细胞仪监测细胞免疫表型变化。 　　1.4 四种DDP浓度预处理后CIK杀伤效果影响 　　分别向Namalwa细胞、SU-DHL-4细胞中加入浓度为0、25、50、75 μg/L的DDP培养18 h，再加入CIK细胞，CIK细胞与淋巴瘤细胞的效靶比为20∶1，用CFSE/PI双标法测CIK细胞对靶细胞的杀伤作用。 　　1.5 三种DDP时间预处理后CIK杀伤效果 　　分别向Namalwa细胞、SU-DHL-4细胞中加入浓度为25 μg/L的DDP，再分别培养18、24、36 h后，加入CIK细胞，CIK细胞与淋巴瘤细胞的效靶比为20∶1，用CFSE/PI双标法测CIK细胞对靶细胞的杀伤作用。 　　1.6 流式细胞仪监测CIK细胞免疫表型变化并检测CIK细胞对靶细胞的杀伤效果 　　CIK培养期间用流式细胞仪监测细胞免疫表型变化。细胞样本采用CFSE/PI双标法进行检测。分别收集处理后的细胞样本上流式细胞仪进行检测，取30 000～50 000个细胞进行分析