临床HSPCs移植参考的CD34+细胞检测方法的依据探讨修改..doc

临床HSPCs移植参考的CD34+细胞检测方法的依据探讨 一、欧洲临床细胞分析事务委员会1998年推荐的方法 (检测实验室采用) 以下是其发表文章的摘要译文： 对造血干/祖细胞(HSPCs)移植可行性的可靠评价指征的需要，推动了以CD34特征分子为基础的流式细胞术定量测定HSPCs方法的发展。虽然流式细胞术测定低含量细胞偏差较大，但近来技术的进展促进了测定的准确性和精度的提高。在此，回顾了现已报道的文献，经过比较我们推荐如下的CD34+HSPCs检测方法的原则： 1）用强荧光标记Ⅰ/Ⅲ型的CD34膜单抗；2）在数据采集时剔除碎片或小细胞成分，如血小板、未裂解红细胞以及细胞碎片等；3）进行CD45膜标记复染，界定HSPCs的范围；4）在流式结果分析时，对低表达CD45+（即弱阳性）和侧向角(SSC)低光值细胞群(也就是采集数据图中SSC low-CD45dim部分)，通过圈门从其他干扰细胞中区分出CD34+HPC的比例。5）统计的CD34+细胞计数应包含CD34弱阳性和强阳性细胞；6）结果应是扣除了阴性对照值(非特异性结合的荧光值)；7）对于白细胞制品，计数时采集细胞应满足不少于100个CD34+细胞，以保证10%的精度； 现存有待解决的技术问题包括：1）用单平台检测方案取代传统的双平台检测模式，如何用单独流式细胞仪检测CD34+细胞来取代目前的流式细胞仪和血液分析仪联合应用的模式（采用绝对计数管，下文中提到）。2）单平台测定方法的校准问题，3）样本制备的优化问题。有关优化临床应用的问题将提上日程，那就是如何确定满足长期或短期康复治疗所需HSPCs的精确表型及所需的细胞数量。 原文： Cytometry. 1998 Jun 15;34(3):128-42. Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells. European Working Group on Clinical Cell Analysis. Gratama JW, Orfao A, Barnett D, Brando B, Huber A, Janossy G, Johnsen HE, Keeney M, Marti GE, Preijers F, Rothe G, Serke S, Sutherland DR, Van der Schoot CE, Schmitz G Department of Clinical and Tumor Immunology, Daniel den Hoed Kliniek, Rotterdam, The Netherlands. gratama@immh.azr.nl Abstract The need for a rapid and reliable marker for the engraftment potential of hematopoietic stem and progenitor cell (HPC) transplants has led to the development of flow cytometric assays to quantitate such cells on the basis of their expression of CD34. The variability associated with enumeration of low-frequency cells (i.e., as low as 0.1% or 5 cells/microl) is exceedingly large, but recent developments have improved the accuracy and precision of the assay. Here, we review and compare the major techniques. Based on the current state of the art, we recommend 1) bright fluorochrome conjugates of class II or III monoclonal antibodies (mAbs) that detect all glycoforms of CD34, 2) use of a vital nucleic acid dye to exclude platelets, unlysed red cells, and debris or use of 7-amino actinomycin D to exclude dead cells during data a