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专题2 微生物的培养与应用 (2011全国新课标高考理综,39)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题: (1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该培养基属于培养基。 (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即和。 (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力。 (4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。 【解析】 (1)在以原油为唯一碳源的培养基中,分解原油的细菌可以大量繁殖,而其他细菌不能生存。此种培养基属于选择培养基。 (2)纯化菌种常用平板划线法和稀释涂布平板法。 (3)在以原油为唯一碳源的培养基上,在菌落周围的原油被分解而形成分解圈,分解圈越大,说明该菌株降解能力越强。 (4)实验室灭菌有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,实验操作要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。 【答案】 (1)原油 选择 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 (3)强 (4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰 2.(2010山东高考理综,34)生物柴油是一种可再生的清洁能源,其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现,在微生物M产生的脂肪酶作用下,植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)。 (1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发,宜选用、方法从油料作物中提取。 (2)筛选产脂肪酶的微生物M时,选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供,培养基灭菌采用的最适方法是法。 (3)测定培养液中微生物数量,可选用 法直接计数;从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测,以确定其应用价值;为降低生物柴油生产成本,可利用技术使脂肪酶能够重复使用。 (4)若需克隆脂肪酶基因,可应用耐热DNA聚合酶催化的技术。 【解析】 (1)因为植物油不易挥发,不能选用蒸馏法,可以用压榨法、萃取法从油料作物中提取。(2)微生物的生长需要水、碳源、氮源和无机盐等,选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源。分析灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等实验室常用灭菌方法的特点可知,培养基灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)测定培养液中微生物的数量,可选用显微镜直接计数法直接计数。提取的脂肪酶在应用于实验或生产之前,要先检测其活性,以确定其应用价值。固定化酶技术可以实现酶的反复利用,降低生产成本。(4)在应用PCR技术扩增DNA片段时,DNA合成(延伸)时温度要控制在72 ,需要具有较强的耐热性的DNA聚合酶催化。 【答案】 (1)压榨 萃取(注:两空顺序无先后) (2)碳源 高压蒸汽灭菌 (3)显微镜直接计数 酶活性(或酶活力) 固定化酶(或固定化细胞) (4)PCR(或多聚酶链式反应,聚合酶链式反应) 3.(2012届山东临沂一轮模考)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水应含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,为土壤样品,请回答下列问题: (1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入作为碳源,中不同浓度碳源的培养基 (A.影响;B.不影响)细菌的数量。如果要测定中活细菌数量,常采用法。 (2)为对照,微生物在中不生长,在中生长,与培养基的主要区别在于 ;使用法可以在上获得单菌落。 (3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小?。 (4)实验过程中如何防止其他微生物的污染?。 【解析】 (1)要从土壤中筛选只能利用苯酚的细菌菌株,应在选择培养基中加入苯酚作为唯一碳源,不同浓度的苯酚会影响细菌的数量。测定细菌数量,常采用平板菌落计数法。(2)由于该细菌菌株只能利用苯酚,中含有苯酚,可培养获得分解苯酚的菌株,中无苯酚,不能获得分解苯酚的菌株。使用平板划线法可以在上获得单菌落。(3)自变量为不同菌株,因此,本实验用相同浓度的苯酚培养不同菌株,一定时间后,测定培养液中苯酚含量的变化情况。若苯酚浓度减小幅度大,说明此菌株分解苯酚能力较强。(4)为防止其他微生物的污染,实验器材、接种环境都需要灭菌,实验过程要确保无菌操作。 【答案】 (1)苯酚 A 平板菌落计数(活菌计数或菌落计数) (2)含除苯酚外的其他碳源,以苯酚作为唯一碳源 平板划线(稀释涂布平板) (3)用相同苯酚浓度的培养液培养不同菌株,一定时间后,测定培养液中苯酚的含量