茯苓多糖提取分离的方法.pptVIP

本实验结果表明PS 显著促进荷瘤小鼠脾脏和胸腺淋巴器官的发育生长,体外对小鼠淋巴细胞尤其是B 淋巴细胞的增殖有显著促进作用,且可显著提高正常小鼠N K 细胞杀伤活性, 可以通过促进淋巴细胞增殖,增强机体特异免疫功能而发挥抗肿瘤作用。而且PS 可以拮抗免疫抑制药52Fu 所致的免疫抑制。 * 1 概述 2 茯苓多糖结构及理化性质 3 茯苓多糖的提取 4 茯苓多糖纯化方法 1 概述 多糖是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞中的天然大分子物质，一般常由100个以上甚至几千个单糖通过糖苷键连接而成，分子量在数万至数百万之间…。多糖类包括植物多糖、动物多糖及微生物多糖，在某种程度上均具有免疫促进作用，而植物多糖尤为重要。多糖作为生物效应调节剂，主要影响网状内皮系统、巨噬细胞、淋巴细胞、白细胞，以及RNA、DNA和蛋白质的合成，CAMP与cGMP的含量、抗体或补体的形成以及干扰素的诱生旧1。多糖具有多方面的生物活性，能够调节机体免疫机能，具有抗病毒、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等功能，因而越来越受重视，尤其是对其抗肿瘤作用的研究已达到分子受体水平。多糖的抗肿瘤途径主要为直接抑制肿瘤细胞的生长、抗氧化、清除自由基，改变肿瘤细胞膜的生长特性、诱导肿瘤细胞凋亡及影响癌基因的表达等一- 现代研究认为茯苓的主要成分为茯苓聚糖、茯苓酸、蛋白质、卵磷脂、脂肪、胆碱等。 有效成分主要是茯苓多糖。它能增强小鼠的淋巴细胞功能；促进体液免疫；可使胸腺淋巴结增大；末梢血中的细胞数量增多。茯苓多糖还有很强的抗肿瘤作用，可延长患癌症动物生存期。 茯苓多糖 据国内的一些研究报道，对于茯苓多糖主要有两种定义。一种认为茯苓多糖是由茯苓菌核提取得到的，分子中主要是β—1→3葡萄糖结构，糖链上分布有少量的β—1→6结构的葡萄糖侧链。如潘琦、何兰茜等。另一种是认为茯苓菌核中含有的为茯苓聚糖(pachyman),茯苓聚糖经化学修饰切去分子主链上的β—1→6葡聚糖支链后,得到β—1→3葡聚糖称为茯苓多糖(pachymaran)，如蒋先明,石清东。 2 茯苓多糖结构及理化性质 茯苓多糖的结构是50个β—1→3结合的葡萄糖单位中有一个β—1→6结合的葡萄糖基支链和1到2个β—1→6结合的葡萄糖基间隔。 茯苓多糖难溶于水，可溶于碱液，不溶于高浓度乙醇、正丁醇及丙酮等有机溶剂，没有抗肿瘤活性，但经化学修饰或结构改造后，如用Smith降解或氧化法去掉β—1→6支链后则可大大提高新茯苓多糖的水溶性??并使之表现出多种生物活性。 硫酸酯化茯苓多糖结构 3 茯苓多糖的提取 　茯苓多糖主要存在于茯苓细胞壁中，按照溶解度的不同又分为水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖。通常采用水提醇沉法、碱提醇沉法提取。??? 　　水溶性多糖的提取主要与提取次数、时间、固液比及温度等因素有关。随着提取次数增多，多糖的浸出率明显增高，但提取次数不易过多，一般为两次，否则，将造成后期工作量增大，提取成本过高。提取时间延长可提高多糖的浸出率，但浸提时间过长，将造成提取工艺延长。同时，还有可能增加杂质的溶出，通常选3h。固液比也影响多糖的浸出，在保证浸出率的前提下，尽可能减少液体体积，以减少浓缩工作量。多糖的浸出率还与浸提温度有关，随后者的升高而提高，但温度过高可能破坏多糖的结构，一般选择80℃提取。碱溶性多糖的提取一般在4℃下进行，其影响因素除以上几点外，还与碱浓度有关，常采用0.5mol/L。在乙醇沉淀步骤中，浸提液浓缩比及乙醇加量是影响茯苓多糖沉淀率的主要因素 3.1水提醇沉法 称取一定量茯苓粉末→热水浸提→抽滤→滤液减压浓缩(浸提液∶浓缩液=10∶1) →95%乙醇沉淀（含醇量达80%）→于冰箱中静置过夜→离心→沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤→真空干燥得茯苓多糖粗品。该法采用水作为溶剂，具有价廉、无毒、操作安全等优点，其缺点是浸提时间长且提取率较低。 3.2 稀碱浸提法 稀碱法浸提碱溶性茯苓多糖应注意，在提取结束后应迅速用醋酸中和，以免多糖活性受影响。取一定量茯苓粉末溶于0.5 mol/L稀碱液中， 4℃放置过夜，滤液以10%的醋酸中和至中性，再加入95%乙醇沉淀，以下步骤同水提醇沉法。该法提取率较水提醇沉法高，但浸提程序较繁琐，浸提条件较剧烈，极易破坏多糖的立体结构，使其生物活性受到限制。 3.3 酶+热水浸提法 该法通过外加酶降解茯苓的细胞壁，从而促进茯苓多糖的浸出。通常加入蛋白酶或植物复合酶，后者主要是由纤维素酶、中性蛋白酶、果胶酶等组成的混合酶系。采用植物精提复合酶+热水浸提法提取茯苓多糖，在普通热水浸提基础上加入酶解步骤，通过改变酶加入量、酶解温度、酶解时间等因素将茯苓多糖的浸出率提高到热水浸提法的2.32倍。采用有机溶