蛋白质工程-绪论.pptVIP

* * * * * * 脑啡肽(Enk)N端5肽线形结构是与δ型受体结合的基本功能区域，干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒抗肿瘤的细胞因子。黎孟枫等人化学合成了EnkN端5肽编码区，通过一连接3肽编码区与人α1型IFN基因连接，在大肠杆菌中表达了这一融合蛋白。以体外人结肠腺癌细胞和多形胶质瘤细胞为模型，采用3H－胸腺嘧啶核苷掺入法证明该融合蛋白抑制肿瘤细胞生长的活性显著高于单纯的IFN，通过Naloxone竞争阻断实验证明，抑制活性的增高确由Enk导向区介导。 * 通常饭后30～60min，人血液中胰岛素的含量达到高峰，120～180min内恢复到基础水平。而目前临床上使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰且持续180～240min，与人生理状况不符。实验表明，胰岛素在高浓度（大于10－5mol/L）时以二聚体形式存在，低浓度时（小于10－9mol/L）时主要以单体形式存在。设计速效胰岛素原则就是避免胰岛素形成聚合体。类胰岛素生长因子－I(IGF－I)的结构和性质与胰岛素具有高度的同源性和三维结构的相似性，但IGF－I不形成二聚体。IGF－I的B结构域（与胰岛素B链相对应）中B28－B29氨基酸序列与胰岛素B链的B28－B29相比，发生颠倒。因此，将胰岛素B链改为B28Lys－B29Pro，获得单体速效胰岛素。该速效胰岛素已通过临床实验。 * * * * * * * * 3）治癌酶的改造 如疱症病毒胸腺嘧啶激酶(TK) 是一种治疗癌症的酶，从大量的随机突变中筛选出一种，在酶活性部位附近有6个氨基酸被替换，催化能力分别提高数十倍。 4）蛋白质活性的改变 将胰岛素B链改为B28Lys－ B29Pro，获得单体速效胰岛素。该速效胰岛素已通过临床实验。 * 胰岛素治疗 猪 人 全球已诊断的Ⅱ型糖尿病患者达1.3亿人，我国已超过4000万人.中国城市人口治疗糖尿病每年直接人均医疗花费为451美元，治疗患有糖尿病并发症的患者花费则高达1694美元。在糖尿病用药中，胰岛素是最有效的糖尿病治疗药物之一，也是1型糖尿病人惟一的治疗药物。此外，还有30%～40%的2型糖尿病患者最终需要使用胰岛素。 * 胰岛素的改造 天然胰岛素的缺点: 在高于生理浓度(10-8~10-10 mol/L)自身聚合[药用浓度高, 10-4 mol/L] 发挥生理功能需要单体形式与专一受体结合 目标: 研制以单体存在的胰岛素 * 解决途径 基于类胰岛素生长因子IGF-1是以单体形式存在,将胰岛素B链的B28-B29的残基序列颠倒成IGF-1 相应序列 向胰岛素二聚体形成面引入带电荷或具有大的侧链的残基,以阻碍二聚体的形成 中国科学C辑 2002；32（4） * * 胰岛素的缓释改造 胰岛素属小分子蛋白,皮下注射进入血液后被快速代谢, 给药频繁 运用不同策略对其缓释,减少给药次数 维持血药浓度,防止胰岛素浓度过高造成低血糖 问题 * 地特胰岛素 诺和平（Levemir） 诺和诺德 2013年销售额18亿美元 5）嵌合抗体和人缘化抗体 嵌合抗体就是用人抗体的恒定区替代鼠单克隆抗体的恒定区，这样它的免疫原性就显著下降 人缘化抗体就是将抗原吸附区域嫁接到人抗体上，这样抗体上的外源肽链降低到最小，免疫原性也就最小 。人缘化抗体如治疗脊髓性白血病的ANTI－CD33等，其免疫反应可以忽略不计。 * 饲料用酶的分子改良与产品研制 饲料用抗菌肽的分子改良与产品研制 重要农作物蛋白质标记的分离鉴定 食品用酶及抗氧化酶的分子改良与产品研制 有机磷降解酶及毒素解毒酶的分子改良与产品研制 重大动物疫病快速检测试剂的研发 蛋白质工程在农业方面的应用 * 意义 在医药、工业、农业、环保等方面应用前景广泛 对揭示生命现象的本质和生命活动的规律具有重要意义 是蛋白质结构形成和功能表达的关系研究中不可替代的手段 基础研究、应用开发 * 1.构象的快速测定手段: 以分子定向改造为目标的蛋白质工程须借助于精确的三维结构信息,而目前主要靠X-射线单晶体结构分析,受到单晶培养的限制。目前正在寻求通过电子衍射三维分析、二维核磁共振等手段来克服上述限制 蛋白质工程存在的问题 * 2. 基因高效表达以及有效的下游技术 寻找高效表达载体、分泌性寄生系统以及各种高效批量分离技术是克服这一限制的关键 蛋白质工程存在的问题 * 复习思考题 掌握蛋白质工程的概念 熟悉蛋白质工程的基本研究内容 关注蛋白质工程领域，了解蛋白质工程在生命科学中的应用及意义 * * 1926年，Sumner从刀豆中提纯了脲酶，首次证明酶的本质是蛋白质。 1932年，英国化学家Krebs等提出合成尿素的鸟氨酸循环多酶反应途径。 1937年，Krebs公布了三羧酸循环的研究成果。 194