枳朴方中空栓对术后肠麻痹大鼠肠道屏障功能的影响.docVIP

枳朴方中空栓对术后肠麻痹大鼠肠道屏障功能的影响 　　摘要：目的 观察枳朴方中空栓对术后肠麻痹大鼠肠道菌群及结肠上皮细胞凋亡率的影响，并探讨其作用机制。方法 将50只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、培菲康中空栓组及枳朴方中空栓低、高剂量组。通过子宫切除手术建立术后肠麻痹模型。于造模后48 h检测大鼠粪便大肠杆菌、双歧杆菌及结肠上皮细胞凋亡的变化。结果 与空白对照组比较，模型对照组大肠杆菌明显增多、双歧杆菌明显减少（P0.01）；与模型对照组比较，枳朴方中空栓高剂量组大肠杆菌明显减少、双歧杆菌明显增多（P0.01）。与空白对照组比较，模型对照组结肠上皮细胞凋亡率明显增高（P0.01）；与模型对照组比较，枳朴方中空栓高剂量组结肠上皮细胞凋亡率明显降低（P0.01）。结论 枳朴方中空栓能够改善术后肠麻痹大鼠肠道菌群紊乱及肠上皮细胞凋亡情况，从而发挥预防和治疗术后肠麻痹的作用。 　　关键词：枳朴方中空栓；术后肠麻痹；肠道菌群；肠上皮细胞凋亡率；大鼠 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0049-03 　　术后肠麻痹是外科常见并发症，发病率高，危害大。肠麻痹后由于肠道压力升高，肠道内细菌大量滋生，肠黏膜萎缩，肠屏障破坏，使肠道细菌及内毒素发生易位，甚至引起粘连及吻合 　　瘘等[1]。枳朴方中空栓为治疗术后肠麻痹的中药制剂，可以在术后立即给药，不受术后禁食限制，使用方便，但其治疗机制尚不明确。本研究通过建立大鼠术后肠麻痹模型，观察枳朴方中空栓对术后肠麻痹大鼠肠道菌群及肠黏膜的影响，旨在探讨枳朴方中空栓治疗术后肠麻痹的作用机制。 　　1 实验材料 　　1.1 动物 　　50只健康清洁级雌性SD大鼠，体质量（220±20）g，山西省中医药研究院实验动物室提供，许可证号：SCXK（晋）2012-0312。 　　1.2 药物与试剂 　　枳朴方组成：枳实、厚朴、丹参、大腹皮。饮片来源：枳实、丹参、大腹皮（亳州市远光中药饮片厂）、厚朴（安徽省万生中药饮片有限公司）。双歧杆菌三联活菌胶囊（培菲康），上海信谊药厂有限公司，批水合氯醛，北京化工厂，批号081104；BBL培养基，青岛高科园海博生物技术有限公司，批SS琼脂，杭州天和微生物试剂有限公司，批Cell Cycle Staining Buffer，联科生物，批 　　1.3 仪器 　　KDC-1044低速离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；FC 500，BECKMAN COULTER；厌氧培养产气袋，法国生物梅里埃公司；DNP-303-3电热恒温培养箱，金坛市天瑞仪器有限公司。 　　1.4 中空栓制备 　　加热40 ℃融化半饱和脂肪酸甘油酯，倒入已涂抹脱模剂的模具中，冷却后加入药物溶液封底。枳朴方高剂量组中空栓每粒含枳朴方浸膏0.96 g，枳朴方低剂量组中空栓每粒含枳朴方浸膏0.48 g，培菲康中空栓每粒含药量为35 mg。 　　2 实验方法 　　2.1 造模 　　所有大鼠禁食不禁水24 h，除空白对照组外，其余大鼠用3.5%水合氯醛按10 mL/kg腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠腹部髂骨水平做一长约2 cm的纵行切口，寻找两侧子宫，钝性剥离子宫与周围组织，继而由子宫与阴道交界处切除子宫，缝合腹部切口[2]。 　　2.2 分组与给药 　　将50只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、培菲康中空栓组及枳朴方中空栓低、高剂量组，每组10只。模型对照组苏醒后与空白对照组均予以中空栓空栓；培菲康中空栓组予以培菲康中空栓；枳朴方中空栓低、高剂量组分别予以枳朴方低、高剂量栓。枳朴方低、高剂量组给药量分别为2.22、4.44 g/kg；培菲康组给药量为0.14 g/kg。于造模后大鼠苏醒后开始直肠给药，纳入后按压30 min，待其充分溶化。 　　2.3 检测指标 　　2.3.1 肠道菌群检测方法 大鼠术后给药2 d，禁食12 h后，以3.5%水合氯醛按10 mL/kg腹腔注射，麻醉后腹部做一切口，在回盲部上1 cm处剪开结肠，无菌称取大便200 mg，加入无菌生理盐水1.8 mL，漩涡混悬仪振摇5 min，成10-1浓度。取0.1 mL加入事先准备好的加有无菌生理盐水0.9 mL的玻璃试管中充分混匀，成10-2浓度，再按10-3、10-4、10-5、10-6、10-7系列倍比稀释，选择合适的稀释度，分别取100 ?L，接种于BBL培养基、EMB培养基（分别为双歧杆菌、大肠杆菌选择性培养基），每个稀释度设一个重复。前者放入厌氧袋，分别予37 ℃厌氧培养和恒温需氧培养48 h。选择合适的稀释度培养基上（30～300个菌落者）生长的