游离脂肪酸对糖尿病大鼠心肾病理改变的影响.docVIP

游离脂肪酸对糖尿病大鼠心肾病理改变的影响 　　【摘要】 目的 对雄性Wistar糖尿病大鼠外源性输注脂肪乳，提高大鼠血液中游离脂肪酸（FFA）的浓度，观察大鼠在不同浓度游离脂肪酸作用下，心肌细胞直径的改变、肾小球体积的改变以及心肌和肾小球上白介素-6（IL-6）的不同表达。方法 制作糖尿病大鼠模型，按照随机数字表编号将DM大鼠分入对照组和实验组，颈静脉穿刺插管，在输液前后，分别经颈静脉内采血，分离血清，待检测，实验结束，分离心脏及两侧肾脏，测量左侧肾脏质量，将心肾组织用4%中性甲醛固定，制作切片，进行HE染色和免疫组化组织染色。EllisAE法检测血清FFA，光学显微镜下测量各组大鼠心肌细胞直径和肾小球面积，计算肾小球平均体积（VG）并计算肾重体重比值，测量各组的心肌和肾小球的IL-6光密度值，统计各组数据之间的差异是否有统计学意义及其相关系数。结果 ①实验组大鼠的血清FFA水平明显升高，比对照组升高2-4倍。实验组大鼠随着脂肪乳输注时间的增加，肾重体重比值渐变大，4天组、6天组有统计学意义，与游离脂肪酸相关系数为0.782，P0.01。实验组大鼠的肾小球体积随着脂肪乳输注时间的增加而增加，自2天组开始肾小球体积增大有统计学意义，与血清中游离脂肪酸相关系数为0.837，P0.01，与肾小球IL-6的表达相关系数为0.843，P0.01。②对照组大鼠肾小球中IL-6基本不表达或弱表达，测量其平均光密度分别为0.1612、0.1583、0.1579；实验组大鼠IL-6水平较对照组明显增高，2天组、4天组、6天组光密度分别为0.2173、0.4409、0.5294，2天组开始就有统计学意义。③心肌细胞HE染色显示：实验组大鼠较对照组大鼠心肌细胞肥大，随着脂肪乳输注时间的延长，心肌细胞直径渐增大，4天组、6天组有统计学意义。随着脂肪乳输注时间延长，心肌细胞局部IL-6表达增多，自2天组就有统计学意义，与FFA浓度相关系数为0.753，P0.01，与心肌细胞局部IL-6光密度水平相关系数为0.808，P0.01。结论 游离脂肪酸引起糖尿病大鼠肾重体重比值增加、肾小球体积增大、肾小球局部IL-6表达增加，并且随着脂肪乳注射时间延长，上述改变明显。肾重体重比值和肾小球的改变可能与局部IL-6高表达相关。游离脂肪酸引起糖尿病大鼠心肌细胞肥大，随着FFA浓度的增加，肥大明显，肥大改变可能与局部IL-6表达相关。 　　【关键词】 Wistar大鼠；糖尿病；游离脂肪酸 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.004 文章编号：1004-7484（2013）-06-2863-02 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物及糖尿病动物模型的建立 健康雄性Wistar大鼠30只，6-8周龄，体重180-200g，由中国医科大学实验动物中心提供。（SPF级），普通饲料适应性喂养l周，后给予高脂饮食4周。 　　使用前临时配制STZ溶液。高脂饲料喂养4周后的大鼠，禁食12h过夜后，称重，按照40mg/Kg，腹腔注射1%STZ一次。继续高脂喂养72小时，血糖检测，空腹血糖（FBG）≥1l.lmmol/L者为DM大鼠，有28只经检验成模，进入实验。 　　1.2 研究对象和分组 按照随机数字表将大鼠分入输入生理盐水的对照组和输入脂肪乳的实验组。实验组继续给予高脂饮食一周，对照组普通饲料饲养。 　　1.3 方法操作 　　1.3.1 大鼠颈静脉穿刺插管手术 称重，用3%戊巴比妥钠（4mg/Kg）腹腔注射麻醉，暴露并分离右侧颈静脉，以PE50软质塑料管行颈静脉插管，插管深度约1-2cm。远端穿过皮下固定于颈背部皮肤处。 　　1.3.2 静脉输注 经大鼠颈背部导管采血后，静脉导管与微量输液装置连接，以微量输液泵24小时连续输注。FFA组（n=15）：输注20%英脱匹利特+肝素钠（英脱匹利特：肝素钠=lml：40UI），输注速率0.6-1ml/h，以维持循环中FFA水平高于基础值2-4倍，输液持续2-6天（FFA-2d：n=5，FFA-4d：n=5，FFA-6d：n=5）；NS组（n=13，NS-2d，n=5，NS-4d，n=4，NS-6d，n=4）以相同速率（0.6-1.0ml/h）连续静脉输注生理盐水。实验结束，经颈静脉内采血，分离血清，于-80℃冰箱保存，测定血FFA水平。 　　1.4 主要试剂与仪器 　　1.4.1 主要仪器 ①显微照相系统，日本奥林巴斯（Olympus，TurboScan） 　　②生物显微照相分析系统，（日本Olympus，BX51）。 　　1.4.2 试剂 ①血清游离脂肪酸试剂盒，上海研吉生物科技有限公司；②免疫组化试剂盒一抗、二抗、DAB显色剂均购于北京中杉生物技术有