激活自噬减轻心肺复苏后Wistar大鼠脑损伤.docVIP

激活自噬减轻心肺复苏后Wistar大鼠脑损伤 　　【摘要】目的观察自噬（autophagy）在心肺复苏（CPR）后Wistar大鼠脑损伤中的作用。方法实验一：36只健康成年雄性Wistar大鼠通过体外交流电刺激诱发心室颤动（VF）， VF（0）前和ROSC后1、2、4、8、12 h取大脑皮层观察beclin-1 和LC3Ⅱ的表达。实验二：60只Wistar大鼠随机（随机数字法）分为对照组（control）、自噬激活剂雷帕霉素组（Rapamycine）和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组（3-MA）。VF前1 h分别向腹腔内注入生理盐水或雷帕霉素1 mg/kg或3-甲基腺嘌呤30 mg/kg。ROSC后2、4 h取大脑皮层，用电镜和Western blot方法观察神经元自噬的激活，免疫荧光观察LC3 颗粒的形成；24、48、72 h进行NDS评分；72 h后取大脑皮层行HE染色和TUNEL染色计数顶叶皮层存活神经元细胞数和凋亡神经元细胞数。beclin-1、LC3Ⅱ 表达和神经元计数用单因素方差分析，NDS比较用秩合检验。结果实验一中28只Wistar大鼠复苏成功。ROSC后2、4 h自噬基因beclin-1和LC3Ⅱ的表达明显低于VF前（P0.05），而ROSC后8、12 h的表达与VF前差异无统计学意义。Rapamycine组动物ROSC后2、4 h大脑皮层beclin-1的表达和LC3Ⅱ的转换明显高于Control组和3-MA组，P0.05。 ROSC后2、4 h Rapamycine组自噬泡数量明显多于Control组和3-MA组；ROSC后4 h Rapamycine组LC3颗粒数也明显多于Control组和3-MA组。ROSC后72 h Rapamycine 组动物大脑皮层存活的神经元细胞数多于Control 组和3-MA组（P0.05）；凋亡神经元细胞数 Rapamycine 组少于Control组和3-MA组（P0.05）。ROSC后24、48、72 h Rapamycine 组的NDS 评分优于control组和3-MA组（P0.05）。结论ROSC后早期大脑皮层神经元beclin-1和LC3-Ⅱ表达下降，通过雷帕霉素促进beclin-1和LC3-Ⅱ表达可以保护神经元细胞和改善神经功能。 　　【关键词】心室颤动；心肺复苏；脑损伤；自噬；雷帕霉素；3-甲基腺嘌呤；beclin-1；LC3Ⅱ 　　Activation of autophagy improves neuron injury after the restoration of spontaneous circulation from ventricular fibrillation in wistar rats ZENG Xiao-yun*， XIONG Hai-xia， LI Xin ， XIA Jin-ming， WEI Hong-yan，LIAO Xiao-xing ， HU Chun-lin ，JING Xiao-li .*Department of Emergency Medicine， the First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University， Guangzhou510080， China 　　corresponding author： Hu Chun-lin ， Email：hu-chunlin@163.com 　　【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of activation of autophagy on cerebral injury after cardiopulmonary resuscitation （CPR） in Wistar rats. MethodsAt first 36 healthy adult male Wistar rats were induced to suffer ventricular fibrillation （VF） by an external transthoracic alternating electricity current shock for 7 minutes and then received CPR. Before VF （0） and at 1 h， 2 h， 4 h， 8 h and 12 hours after the restoration of spontaneous circulation （ROSC） from VF， cerebral cortex were harvested to determine the protein levels of