第三章 高效液相色谱.ppt

高效液相色谱法 一、高效液相色谱法的特点 二、流程及主要部件 三、固定相和流动相 四、主要分离类型 五、影响分离的因素 （一）分配色谱 （二）吸附色谱 （三）离子交换色谱法 （四）排阻色谱法 分配色谱 分配色谱–分离原理 固定相的化学构造 非键合相表面 键合相表面 ODC C18 C8 C1 Phenyl -NH2 -CN 吸附色谱法 分离原理 排阻色谱法(凝胶色谱法) 大分子不能进入多孔中，不被保留，随 Vm流出 中分子部分进入多孔中，一般保留 小分子完全进入多孔中，长时间保留。 高分子化合物分子量及分子量分布 DNA碎片不同碱基支链分离。 流动液贮存提供脱气 输液泵 进样系统 分离系统 检测系统 控制与记录系统 （1）真空泵抽滤系统 （2）低溶性惰性气体导入替换 （3）超声脱气 （4）在线脱气 活塞泵 注射泵 气动泵 进样系统 不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，通常使用所谓六通阀 单波长UV检测器，光源用Hg灯，加滤光片可以到254，280，313，334，365等。生化中用到很多。 多波长 光度计类似，光栅或棱镜分光 标准样品法 谱库 HPLC-FTIR HPLC-MS 高效液相色谱应用实例 对有机酸具有高选择性和高灵敏度 柱后pH调节电导检测 有机酸分析系统流程图 分析条件 分离条件 色谱柱：Shim-pack SCR-102H(8mmI.D．×300mmL.) 1个或2个分析柱连接 保护柱 SCR-102H (6mmI.D.×50mmL.) 流动相：5mM p-甲苯亚磺酸水溶液 流量 ：0.8mL/min 温度 ：40℃或45℃ 检测条件 缓冲液：20mM Bis-tris 水溶液 含 5mM p-甲苯亚磺酸和100μＭ EDTA 流量 ：0.8mL/min 检测器：电导检测器 polarity;+ 样品的分析实例 食品 啤酒，清酒，葡萄酒，酱油等 体液 血清，尿等 医药品 肾的透析液，钙制剂等 发酵 微生物培养液，酸奶等 环境 工厂废水等 有机酸标准品的色谱图1 一个分析柱 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 丙酮酸 4. 苹果酸 5. 琥珀酸 6. 乳酸 7. 甲酸 8. 乙酸 9. 乙酰丙酸 10. 焦谷氨酸 啤酒的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 丙酮酸 4. 苹果酸 5. 琥珀酸 6. 乳酸 7. 甲酸 8. 乙酸 9. 焦谷氨酸 10. 碳酸 前处理 振荡除去碳酸气后， 过滤10μＬ进样 清酒的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 丙酮酸 4. 苹果酸 5. 琥珀酸 6. 乳酸 7. 乙酸 8. 焦谷氨酸 前处理 过滤后，进样10μＬ 葡萄酒的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3 . 酒石酸 4. 苹果酸 5. 琥珀酸 6. 乳酸 7. 甲酸 8. 乙酸 9. 焦谷氨酸 前处理 用水稀释10倍后过滤 进样量10μＬ 酱油的色谱图 1. 磷酸 2. 柠酸 3. 丙酮酸 4. 苹果酸 5. 琥珀酸 6. 乳酸 7. 甲酸 8. 乙酸 9. 乙酰丙酸 10. 焦谷氨酸 前处理 用水稀释10倍后过滤 进样量10μＬ 血清的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 丙酮酸 4. 乳酸 5. 甲酸 6. 乙酸 7. 焦谷氨酸 8. 未知物 前处理 加高氯酸用离心法去沉淀物，取上清液5uL进样 尿样的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 乳酸 4. 甲酸 5. 未知物 6. 焦谷氨酸 7 未知物 前处理 过滤后，进样10μＬ 酸奶的色谱图 1. 磷酸 2. 柠檬酸 3. 琥珀酸 4. 乳酸 5. 甲酸 6. 乙酸 前处理 用水稀释10倍后过滤 进样量10μＬ 工厂废水的色谱图 1. 甲酸 2. 乙酸 3. 丙酸 4. 碳酸 5. 丁酸 6. 戊酸 前处理 过滤后，进样10μＬ 食品安全与污染物 食品安全是所有国家的每个消费者关心的基本问题。 残留农药和兽药是食品中主要的污染物 世界上许多国家制定并实施食品安全法规，但是在美国、加拿大、欧盟以及日本食品安全法规更加严格的完善。 在食品和农产品国际贸易