姜黄素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后核因子—κB表达的影响.docVIP

姜黄素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后核因子—κB表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨姜黄素对大鼠肾缺血再灌注损伤后核因子-κB（NF-κB）表达的影响。 方法 24只大鼠随机分为3 组：假手术组、缺血再灌注组和姜黄素组，每组8只，在肾组织缺血45 min后完全恢复组织灌流。全自动生化分析仪检测肌酐（Cr）、尿素氮（BUN），光镜下观察肾组织病理学改变，Western blotting法检测NF-κB蛋白表达。 结果 与假手术组比较，缺血再灌注组的肾功能指标水平明显增高，光镜下可见肾小管损伤明显加重，Western blotting显示NF-κB表达明显增高，差异有统计学意义（P 0.05）。姜黄素组与缺血再灌注组比较，肾功能指标明显减轻，NF-κB表达显著降低，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 姜黄素能减轻肾缺血再灌注损伤， 其机制可能是抑制NF-κB的表达有关。 　　[关键词] 再灌注损伤；姜黄素；核因子-κB 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（a）-0031-03 　　姜黄素（curcumine，Cur）是从我国传统植物姜黄中提取的生物成分，具有抗炎、调脂等药理学作用，最近的研究结果显示，姜黄素对大鼠心肌、肝脏和肾脏的缺血再灌注损伤（ischemia and reperfusion injury，IRI）均具有保护作用，其机制与减轻凋亡、抑制炎症等有关。肾脏IRI常常发生于肾脏相关手术中，例如肾移植、肾部分切除、肾血管成形术等，是急性肾功能衰竭的主要原因之一[1]。NF-κB是一种重要的核转录因子，在真核细胞中广泛存在，参与许多肾脏疾病的发生[2]。因此，本研究观察姜黄素对肾脏缺血再灌注组织内NF-κB表达的影响，并进一步探讨其机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　健康雄性Wistar大鼠24只，体重220～280 g，由武汉大学医学院实验动物中心提供，随机分为3组，假手术组（n = 8）、缺血再灌注组（n = 8）、姜黄素组（n = 8）。NF-κB、β-actin（内参）单克隆抗体购自Santa Cruz公司。姜黄素购自武汉中西仪器大全公司，含量大于90%。 　　1.2 实验模型的制备 　　假手术组：行2%戊巴比妥钠腹腔麻醉（45 mg/kg），500 U肝素钠腹腔注射，游离双侧肾脏，切除右肾，缝合腹壁。缺血再灌注组：实验过程与假手术组相同，但在右肾切除、左肾游离后进行左肾缺血，左肾动、静脉用血管钳夹闭45 min然后恢复灌流。姜黄素组：于左肾动脉夹闭前30 min尾静脉注射姜黄素注射液（20 mg/kg），余同缺血再灌注组。 　　1.3 标本采集与处理 　　分别于组织再灌注24 h后静脉采血2 mL检测肾功能指标血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平。后处死各组大鼠，留取左肾组织标本，一部分速置-80℃冰箱中保存待测，另一部分用4%多聚甲醛固定、石蜡包埋后制备切片。 　　1.4 观察指标 　　1.4.1 Cr、BUN浓度 将血液标本注入试管中，常温3000 r/min、离心10 min后，用全自动生化分析仪（奥林巴斯公司Au2700）测定血清Cr、BUN浓度。 　　1.4.2 组织学检查 固定的肾组织制备石蜡切片后，行HE染色，后在奥林巴斯400倍光镜下观察肾组织的病理改变。 　　1.4.3 Western blotting检测NF-κB表达 从液氮罐中取出保存后的肾组织，二辛可宁酸（BCA）法检测蛋白浓度，取40 μg上样，用10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，电转到硝酸纤维素膜（NC）膜上，使用5%的脱脂牛奶封闭2 h，后加入NF-κB单克隆抗体，按1∶1000稀释，4℃摇床过夜。之后与辣根过氧化物酶结合的二抗结合，按1∶2000稀释，室温孵育1 h，TBST洗涤后，增强化学发光法（ECL）法显色后照相。 　　1.5 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 17.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析，比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 各组Cr和BUN水平比较 　　与假手术组比较，缺血再灌注组和姜黄素组的肾功能指标Cr和BUN明显增高，差异有统计学意义（P 0.05）。姜黄素组的Cr和BUN水平与缺血再灌注组比较明显降低，差异有统计学意义（P 0.05），见图1。 　　2.2 肾组织病理学改变 　　假手术组：光镜下见肾小管上皮细胞无明显改变，间质无明显充血水肿，也无炎性细胞浸润。缺血再灌注组：光镜下可见肾小管上皮细胞明显变性坏死，管腔扩张，管腔内有脱