第十一章色谱法基本概念及经典液相色谱法课件.pptVIP

* 本章结束! 谢谢! * 第三节基本色谱法的分离机制 各组分在流经凝胶表面时，由于小分子能完全渗透进入凝胶内部孔穴而被滞留，中等分子可以部分进入较大的一些孔穴，大分子则完全不能进入孔穴而只能沿凝胶颗粒之间的空隙随流动相流动。于是样品中各组分按大分子、中等大小的分子、小分子的先后顺序流出色谱柱，从而得以分离。 * 第四节经典液相色谱法 第四节 经典液相色谱法 一、柱色谱法 （一）吸附柱色谱法 固定相 ：吸附剂 硅胶 　硅胶的吸附活性与含水量有关。含水量越大，活性级数越大，吸附活性越低，吸附能力越弱。 * 第四节经典液相色谱法 硅胶呈微酸性，主要用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体、萜类等。 氧化铝 吸附活性与其含水量密切相关，水分的增加能降低其吸附能力。 　中性氧化铝用于分离酸性、中性和碱性化合物，如生物碱、挥发油、甾体、萜类及在酸碱中不稳定的酯类、苷类等。 　 * 第四节经典液相色谱法 聚酰胺 主要通过分子中的酰氨基与化合物质子给予体形成氢键而对该物质产生吸附，因形成氢键的能力不同，吸附能力也不同，从而使各化合物得以分离。 主要用于酚类（含黄酮类、蒽醌类、鞣质类等）、酸类、硝基类等物质的分离。 * 第四节经典液相色谱法 大孔吸附树脂： 主要通过范德华引力或产生氢键而吸附被分离物质，选择性则由其多孔性网状结构所决定。 主要用于水溶性化合物的分离及纯化，如皂苷、其它苷类物质等。 * 第四节经典液相色谱法 流动相 吸附色谱中，流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分离组分分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程，极性强的流动相分子占据吸附活性中心的能力强，具有强的洗脱作用；而极性弱的流动相分子竞争占据吸附活性中心的能力弱，洗脱作用就弱。 * 第四节经典液相色谱法 流动相的选择 　必须同时兼顾被测物的性质、吸附剂的活性和流动相的极性等三方面 。 　一般原则是：若被分离组分极性较小，宜选用吸附活性较大的吸附剂和极性较小的洗脱液；反之，则应选择吸附活性小的吸附剂和极性较强的洗脱液。 * 第四节经典液相色谱法 被测物质的极性、吸附剂活性和流动相极性之间的关系示意图 * 第四节经典液相色谱法 （二）分配柱色谱法 固定相 由载体及涂渍或键合在载体表面的固定液组成。 载体 　　是一种惰性物质，主要起负载或支撑固定液的作用。 固定液 　正相色谱：强极性溶剂，如水、甲醇等。 　反相色谱：非极性或弱极性溶剂，如液体石蜡等。 * 第四节经典液相色谱法 流动相 正相色谱：极性小于固定相的醇类、酮类、酯类、卤代烷、苯或其混合物。 反相色谱：水、稀醇等极性溶剂。 应用 各类化合物的分离，特别是亲水性物质，如极性较大的酚类、糖类、氨基酸衍生物等。 * 第四节经典液相色谱法 （三）离子交换柱色谱法 固定相　离子交换树脂 交联度：离子交换树脂中所含交联剂的量。 　用于衡量离子交换树脂的选择性，交联度大，树脂的网状结构紧密，网眼小，选择性好。 交换容量：实验条件下，每克干树脂真正参加交换的活性基团数。 　用于衡量离子交换树脂的交换能力，交换容量大，树脂的交换能力强。 * 第四节经典液相色谱法 流动相 　　水为溶剂的缓冲溶液。 应用 去离子水的制备，天然药物化学成分的分离，各种有机酸、氨基酸的分离制备，抗生素的纯制、去除干扰离子、测定某些盐类的含量等。 * 第四节经典液相色谱法 （四）空间排阻柱色谱法 固定相　 多孔性凝胶，常用葡聚糖凝胶。 选择凝胶时应使试样的相对分子量落入凝胶的相对分子质量范围内。 流动相 　 一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则选择四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。 * 第四节经典液相色谱法 应用 　　天然药物化学和生物化学的研究，水溶性高分子化合物如蛋白制剂等的分析。 * 第四节经典液相色谱法 二、平面色谱法 （一）薄层色谱法 薄层色谱法是将固定相（如：吸附剂）均匀地涂铺在光洁的玻璃板、塑料板或金属板上形成薄层，在薄层板上进行分离分析的方法。 分离机制 　与吸附柱色谱的分离机制相似。 * 第四节经典液相色谱法 比移值与相对比移值 　 比移值（retardation factor，Rf）：　 L0 原点 溶剂前沿 A B L1 L2 Rf的测量示意图 * 第四节经典液相色谱法 Rf可用范围是0.2～0.8，最佳范围是0.3～0.5。 相对比移值（relative retardation factor，Rr） Rr可以大于1，也可以小于1。 * 第四节经典液相色谱法 例　题 已知被测物质A和参考物B在同一薄层