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北京师范大学化学学院化学综合实验实验报告课程名称：以α-胰凝乳蛋白酶为催化剂在有机溶剂中合成N-保护的亮-脑啡肽三肽片段实验时间：____ 2014.9.27 — 2014.10.31 __实验地点： 基础化学实验中心化学综合实验室 专业年级：_______ _2012级2班学生姓名：_____________杨博 ___________ 学 号：___________201211151808 ______ 指导老师： ____________邢国文____________ __ 以α-胰凝乳蛋白酶为催化剂在有机溶剂中合成N-保护的亮-脑啡肽三肽片段杨博北京师范大学 化学学院 北京 100875摘要：推荐一个面向理科高年级本科的化学生物学综合实验。以二氯甲烷为溶剂，使用α-胰凝乳蛋白酶为催化剂合成N-保护的亮-脑啡肽三肽片段。关键词：综合实验 化学生物学 酶促合成 亮-脑啡肽 α-胰凝乳蛋白酶实验目的：在做实验的同时开阔视野，了解一些近年来学科交叉研究领域的研究热点；熟悉一些化学生物学实验的基本实验方法与技巧，为今后的进一步科研深造奠定坚实的实验基础；通过本课程的训练，有效的提高独立科研能力和科研创新能力。实验原理：本实验以酪氨酸（Tyr）、双甘肽（Gly-Gly）为起始原料，经过四步反应得到了N-保护的亮-脑啡肽前三肽Z-Tyr-Gly-Gly-OEt。1、酪氨酸在氯化亚砜的作用下酯化，得到酪氨酸乙酯盐酸盐（HCl·Tyr-OEt）；2、酪氨酸乙酯与苄氧羰酰氯（Z-Cl）在碱性条件下反应，得到苄氧羰酰酪氨酸乙酯（Z-Tyr-OEt）；3、Gly-Gly在氯化亚砜作用下酯化，得到甘胺酰甘氨酸乙酯盐酸盐（HCl·Gly-GLy-OEt）；4、Z-Tyr-OEt与Gly-GLy-OEt在二氯甲烷中以α-胰乳蛋白酶催化得到亮-脑啡肽的前三肽，即N-保护的苄氧羰酰酪氨酰甘 胺酰甘氨酸乙酯（Z-Tyr-Gly-GLy-OEt）。实验药品：药品名形状MWnDdmp/°Cbp/°C溶解性水乙醇乙醚乙醇无色液体461.36140.79-117.378.5易溶易溶易溶氯化亚砜淡黄色发烟液体118.96\1.64-10578.8分解易溶易溶Gly-Gly白色叶状结晶或片状晶体，有光泽132.12\\262\溶难不Tyr白色结晶粉末181.20\1.456342\难不不乙醚无色透明液体74.121.350.7134-116.334.6微溶溶HCl-Tyr-OEt白色结晶245.7\\\\溶溶溶HCl·Gly-GLy-OEt白色结晶196.6\\\\溶溶溶乙酸乙酯无色液体88.111.37190.902-83.677.2溶溶溶碳酸氢钾白色晶体100.12\\\\溶不不苯甲醇无色液体108.131.53961.0419-15.3205.7溶易易苄氧羰酰氯无色有刺激性气味的液体170.5\\\\分解溶溶硫酸镁白色粉末120\2.66\112.4溶微不石油醚无色透明液体\\0.64～0.66\40～80不溶溶Z-Tyr-OEt白色晶体343\\\\\\\Z-Tyr-Gly-Gly-OEt白色晶体449.1\\\\\\\三乙胺无色油状液体，有强烈氨臭101.191.40100.726-114.889.5微溶溶丙酮无色液体58.080.78451.3588-94.756.05溶溶溶实验步骤：实验步骤实验现象及解释（1）、HCl·Tyr-OEt的合成取8Ml无水乙醇，用冰盐浴冷至-10℃，缓慢加入2Ml氯化亚砜，加完后继续搅拌20min。加入Tyr1.0g，先初步摇匀，放入磁子，用磁力搅拌器室温搅拌3天。用旋转蒸发仪减压除去溶剂得到白色固体。用乙醇-乙醚重结晶：先用3mL乙醇微热，将固体溶解；在逐步加入乙醚，刚开始一段时间没有晶体析出，用玻璃棒摩擦瓶壁，很快析出大量白色结晶。无水乙醇用冰盐浴冷却到-10℃: 氯化亚砜在受热和有水的条件下易分解。加入酪氨酸后搅拌：酪氨酸不溶于乙醇，所以该反应体系为非均相体系，只有通过搅拌，才能使反应充分进行。采取乙醇-乙醚重结晶：HCl·Tyr-OEt在乙醇中的溶解度大，可以完全溶解，而乙醚是HCl·Tyr-OEt的不良溶剂，通过自由扩撒，在乙醚中结晶析出。实验现象：实验过程中产生大量有刺激性气味的气体，得到白色的结晶。（2）、Z-Tyr-OEt的合成：将HCl·Tyr-OEt0.7g悬浮于14.2mL乙酸乙酯中，加入KHCO31.7g的11.4mL水溶液，冰浴下快速搅拌，15min内滴加Z-Cl的苯甲醇溶液0.61Ml。加完后搅拌20min，撤去冰浴，室温再搅拌2-3h。反应结束后用4mol/L的盐酸酸化，使水相的pH为1，分出有机相，用水、饱和食盐水洗涤，硫酸镁干燥。减压蒸除溶剂后，得到黄色油状物，置于冰水中，缓慢结晶，过