高速逆流色谱法提纯盐酸黄连素对粪肠球菌抑菌效果的研究.docVIP

高速逆流色谱法提纯盐酸黄连素对粪肠球菌抑菌效果的研究 　　[摘要] 目的 探讨高速逆流色谱法（HSCCC）提纯黄连中盐酸黄连素对粪肠球菌体外抑菌效果的影响。 方法 选择150株临床分离的粪肠球菌株为研究对象，随机分为Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组各50株，均配制成2000～3000 cfu/ml的粪肠球菌液；将黄连制成中药煎剂，配制成浓度为1.0 g/ml的A药液；将HSCCC提纯黄连中的盐酸黄连素配制成浓度为1.0 g/ml的B药液；Ⅰ组将粪肠球菌液涂到用A药液与M-H培养基混合的培养基上，Ⅱ组将粪肠球菌液涂到用B药液与M-H培养基混合的药液培养基上，Ⅲ组将粪肠球菌液涂到M-H培养基上，上述培养基均采用环丙沙星（CIP）、红霉素（ERY）、四环素（TE）和青霉素（PEN）药敏纸观察培养基药敏情况。 结果 Ⅰ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为26.0%、40.0%、36.0%、20.0%；Ⅱ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为10.0%、26.0%、14.0%、8.0%；Ⅲ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为46.0%、80.0%、44.0%、26.0%。在对环丙沙星、红霉素、四环素和青霉素的耐药率方面，Ⅲ组Ⅰ组Ⅱ组，三组间耐药率差异均有统计学意义（P0.05）。 结论 HSCCC提纯黄连中盐酸黄连素对临床分离的粪肠球菌菌株具有较强的抑菌活性，其抑菌作用比黄连煎剂强。 　　[关键词] 高速逆流色谱；药敏试验；盐酸黄连素；肠球菌；中药 　　[中图分类号] R378.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（a）-0087-02 　　肠球菌为革兰阳性厌氧菌，是院内感染的第2大病原菌，可引起呼吸道、伤口、血液等多部位感染，其中绝大多数病原体是粪肠球菌，约占80%[1]。近年来，肠球菌多重耐药严重，有文献报道，中药黄连水煎剂对肠球菌有一定的抑菌效果[2]，为探讨从中药黄连中提纯的盐酸黄连素对粪肠球菌的抑菌效果，本研究采用高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography，HSCCC）提纯中药黄连中黄连素，并对粪肠球菌的药物敏感性进行了分析。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2009年2月～2012年12月从本院住院及门诊患者送检的尿液、痰液、血液和脓液等各类标本临床分离到的150株粪肠球菌，随机分为Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组各50株，所有菌株均剔除同一患者同一部位重复分离的粪肠球菌菌株，各类标本均按照《全国临床检验操作规程》第2版要求采集后立即送检，肠球菌的分离与鉴定采用生物梅里埃公司的API肠球菌鉴定条鉴定药敏试验，质控菌株金黄色葡萄球菌 ATCC25923和粪肠球菌 ATCC29212均购自卫生部临床检验中心，所有操作参照产品说明书进行。 　　1.2 药敏纸片 　　青霉素（Penicillin，PEN）（10 μg/片）、红霉素（Erythromycin，ERY）（15 μg/片）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）（5 μg/片）和四环素（Tetracycline，TE）（30 μg/片）均购自英国OXOID公司。 　　1.3 药液的制备 　　将中药黄连制成煎剂，并配制成浓度为1.0 g/ml的A药液；采用HSCCC提纯黄连中盐酸黄连素，HSCCC的溶剂系统为乙酸乙酯-石油醚-甲醇-水（1∶1∶1∶1），并将盐酸黄连素配制成浓度为1.0 g/ml的B药液。 　　1.4 药敏试验 　　Ⅰ组将粪肠球菌液涂到用A药液与M-H培养基混合的药液培养基上，Ⅱ组将粪肠球菌液涂到用B药液与M-H培养基混合的药液培养基上，Ⅲ组将粪肠球菌液涂到M-H培养基上。上述培养基均采用CIP、ERY、TE和PEN药敏纸观察培养基药敏情况。 　　1.5 统计学方法 　　采用SPSS 13.0统计学软件对所有数据进行分析，计数资料使用χ2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　Ⅰ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为26.0%、40.0%、36.0%、20.0%；Ⅱ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为10.0%、26.0%、14.0%、8.0%；Ⅲ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为46.0%、80.0%、44.0%、26.0%；在对CIP、ERY、TE和PEN的耐药率方面，Ⅲ组Ⅰ组Ⅱ组，三组间差异均有统计学意义（P0.05）（表1）。 　　3 讨论 　　肠球菌属肠球菌属，为革兰阳性（G+）球菌，是条件致病菌，常引起腹腔感染、盆腔感染、尿路感染、皮肤软组织感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等，还可危及生命。由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，如高浓度的氨基糖苷类、