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甲状腺激素缺乏对脑发育期胶质细胞影响的研究 　　[摘要] 目的 探讨甲状腺激素缺乏对仔一代Wistar大鼠脑发育期星形胶质细胞和少突胶质细胞的影响。方法 用5 mg/L（5ppm）和15 mg/L（15ppm）甲巯咪唑饮水喂养孕鼠自妊娠至仔鼠出生后第28天，检测仔鼠体内甲状腺激素（TH）水平，采用免疫组化法测定海马胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、髓磷脂碱性蛋白（MBP）含量，分析GFAP阳性细胞的体积密度（Vv），面数密度（NA）和细胞质平均光密度（AOD）及MBP阳性细胞AOD，正常喂养仔鼠为对照组。结果 5ppm组和15ppm组大鼠血清TH水平均低于正常对照组，5ppm组海马CA3区GFAP阳性星形胶质细胞的NA为15.11±2.41，VV为5.27±1.41，细胞质AOD为0.202±0.009，与对照组比较均明显降低，差异有统计学意义（P 0.05）；15ppm组海马CA3区GFAP阳性星形胶质细胞的NA、VV、细胞质AOD分别为15.03±2.23、5.11±1.53、0.089±0.010，与对照组比较，差异有统计学意义（P 0.01）。MBP阳性少突胶质细胞的细胞质AOD在5ppm组为0.234±0.005，15ppm组为0.191±0.006，均较对照组减低，差异有统计学意义（P 0.05或P 0.01）。 结论 甲状腺激素缺乏影响仔鼠海马胶质细胞发育，减少其体积密度和面数密度。 　　[关键词] 甲状腺激素；胶质原纤维酸性蛋白；髓磷脂碱性蛋白；星形胶质细胞；少突胶质细胞 　　[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）07（c）-0007-03 　　甲状腺激素（thyroid hormones，TH）是调节大脑发育的一种重要激素，它在中枢神经系统的分化发育及各种功能的形成过程中发挥十分关键的作用[1]。特别是妊娠前半期，胎儿的甲状腺功能尚未建立，大脑发育所需的TH主要来自母体，此期母体TH水平对胎儿脑发育有重要影响。大脑和海马是学习和记忆的高级活动中枢。海马组织中少突胶质细胞、星形胶质细胞和其他非神经元细胞构成了支持、营养、保护神经元的微环境[2]。本研究通过建立妊娠早期甲状腺功能减退动物模型，观察子代大鼠海马星形胶质和少突胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和髓磷脂碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）体积密度、面数密度和细胞质平均光密度的变化，来进一步获得低TH水平影响脑发育的证据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1动物选择及分组 选用Wistar大鼠，平均体重为（240±12）g（河南省动物中心提供），动物购回后适应性喂养1周，无不良反应、饮食、饮水正常者纳入实验，室温20～25°C，光照与黑暗每12小时更替，普通饲料和三蒸水喂养。于发情期将雌、雄大鼠按2∶1合笼过夜，以次晨发现阴栓或阴道分泌物镜检发现精子者确定为妊娠0 d，记为GD0，取出单笼饲养。共获取孕鼠30只，随机将孕鼠分为对照组、甲状腺功能减退1组、甲状腺功能减退2组，每组孕鼠10只。甲状腺功能减退1组和2组孕鼠分别给予5 mg/L和15 mg/L甲巯咪唑饮水（以后分别称为5ppm组和15ppm组），饲以普通饲料，直至仔鼠出生后第28天（PN28）。 　　1.1.2实验试剂 兔抗大鼠GFAP抗体，兔抗鼠MBP抗体，SABC免疫组化试剂盒，DAB显色试剂盒均购于武汉博士德生物工程技术公司；血清促TH（TSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）试剂盒由美国贝克曼库尔特有限公司提供；甲巯咪唑（规格：5 mg×100片/盒，上海朝晖药业有限公司生产）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物标本的提取 每组随机取出20只仔鼠，处死前1 d禁食水，以10%水合氯醛（350 mg/kg体重）腹腔注射麻醉，经心脏取血，用以检测甲状腺功能，并迅速取大脑组织剥离海马，置于4%多聚甲醛中进一步固定36～48 h。常规石蜡包埋，行冠状位连续切片（6 μm）。 　　1.2.2 免疫组织化学方法染色观察海马CA3区GFAP和MBP的免疫表达 按SABC法免疫组化试剂盒染色步骤进行，以0.01 mol/L PBS溶液代替一抗做阴性对照。光镜下观察海马CA3区蛋白的表达，照相，用图像分析技术及图像分析软件计算海马CA3区 GFAP阳性细胞的体积密度（Vv），面数密度（NA）和细胞质的平均光密度（AOD）以及MBP阳性细胞的AOD。 　　1.3 统计学方法 　　采用SPSS11.5统计学软件包，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，行单因素方差分析（F检验），