平阳霉素新辅助化疗对阴茎癌组织c―myc、Ras―P21、P53蛋白表达影响的研究.docVIP

平阳霉素新辅助化疗对阴茎癌组织c―myc、Ras―P21、P53蛋白表达影响的研究 　　[摘要] 目的 探讨应用平阳霉素新辅助化疗对阴茎癌组织基因蛋白c-myc、Ras-P21、P53表达的影响及意义。 方法 收集哈尔滨医科大学附属肿瘤医院泌尿外科1995～2005年罹患阴茎鳞状细胞癌的住院患者100例，按照术前是否进行辅助化疗分为两组，其中新辅助化疗组50例，术前应用平阳霉素化疗7 d，化疗后行阴茎部分切除术，并行双侧腹股沟淋巴结改良清扫术；对照组50例，直接行手术治疗（手术治疗方法同新辅助化疗组），术前不进行化学药物治疗。应用免疫组织化学法（SP）对两组患者的阴茎鳞状细胞癌组织进行c-myc、Ras-P21以及P53等指标检测。 结果 新辅助化疗组组织标本中c-myc、Ras-P21、P53等指标表达的阳性率经检测分别为30%、27%、23%。对照组组织标本中，c-myc、Ras-P21、P53等指标表达的阳性率经检测分别为52%、48%、50%。新辅助化疗组与对照组的c-myc、Ras-P21、P53指标表达阳性率比较，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 应用平阳霉素新辅助化疗后，阴茎鳞状细胞癌组织中c-myc、Ras-P21、P53蛋白的表达明显下降，平阳霉素新辅助化疗可降低阴茎癌的恶性程度。 　　[关键词] 阴茎癌；平阳霉素；新辅助化疗；免疫组织化学法 　　[中图分类号] R737.27 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（c）-0004-04 　　阴茎鳞状细胞癌是阴茎最常见的恶性肿瘤，传统的治疗方法多采用阴茎部分或全部切除配合腹股沟淋巴结清扫术[1]。临床采用平阳霉素新辅助化疗配合改良的淋巴结清扫术治疗阴茎癌取得了良好的效果。平阳霉素是由我国自主研制的抗肿瘤药物，从放线菌（Streptomycespingyangensisn.sp）培养液中分离得到，目前已成为我国临床常用的抗癌药物，被广泛应用于治疗头颈部等部位鳞癌、皮肤癌、食道癌、外阴癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌和宫颈癌等恶性肿瘤。近年来，平阳霉素在临床应用过程中有不少新的发现与扩展。本研究应用免疫组织化学法研究平阳霉素新辅助化疗后阴茎癌患者肿瘤组织中c-myc、Ras-P21、P53蛋白表达的变化，以证实平阳霉素新辅助化疗治疗阴茎癌的效果。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择哈尔滨医科大学附属肿瘤医院（以下简称“我院”）1995～2005年罹患阴茎鳞状细胞癌患者100例，所有病例均附有完整的临床资料。年龄35～86岁，平均（42.2±0.03）岁；病程5个月～3年，平均（1.6±0.02）年。其中包茎83例，包皮过长17例；临床表现为阴茎头部、冠状沟、包皮内板处丘疹、溃疡、菜花状肿物，脓性分泌物80例，恶臭76例，3例尿道狭窄，有排尿困难；术前、术后病理检测均为阴茎鳞状细胞癌，83%以上的患者有腹股沟淋巴结转移。按照术前是否进行辅助化疗分为新辅助化疗组和对照组，每组各50例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　1.2.1 治疗方法 新辅助化疗组50例，术前于阴茎头肿瘤处取病理组织证实为鳞状细胞癌。常规血液检验如血常规、肝肾功能等，并行胸部正侧位X线片检查，结果正常后进行化疗。化疗方案如下：平阳霉素8 mg+生理盐水2 mL深部肌内注射，每天1次。同时可给予对症支持治疗，给药时间为7 d，2周后经各项检查正常后行阴茎部分切除术加改良腹股沟淋巴结清扫术。 　　对照组50例，术前于阴茎头肿瘤处取病理组织证实为鳞状细胞癌。术前未行任何治疗，行阴茎部分切除术+改良的腹股沟淋巴结清扫术。 　　1.2.2 病理检查方法 本研究的所有标本均来自我院病理科，附有查找完整的临床资料。两组患者术后病理均取材于阴茎头肿瘤组织，检测均为阴茎鳞状细胞癌，标本经10%福尔马林固定、石蜡包埋。每个标本均制成5 μm厚的组织切片3张，3张切片均行c-myc、Ras-P21、P53免疫组化染色。 　　采用免疫组织化学SP法：石蜡切片脱蜡和水化后，冲洗3次；将过氧化酶阻断剂加入；PBS（pH=7.4）冲洗3次；抗原微波修复，pH6.0枸橼酸缓冲液共计15 min冲洗，冲洗后自然冷却，时间共20 min，再次使用PBS清洗标本3次，各1 min；将10%即用型非免疫血清加入每张切片，于37℃下孵育10 min；加入第一抗体（鼠抗人c-myc、ras-P21及P53）4℃过夜；标本加1滴或50 μL的二抗，加入二抗后于37℃下湿盒孵育30 min；使用PBS清洗标本3次，每次1 min；标本加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，37℃下孵育30 min；使用PBS清洗标