用API50CH系统鉴定9株产高光学纯度D―乳酸野生菌株.docVIP

用API50CH系统鉴定9株产高光学纯度D―乳酸野生菌株 　　【摘要】 目的 对从某发酵食品中分离纯化出的9株产高光学纯度D-乳酸的野生菌株（SZD菌株）进行鉴定。方法 用API 50CH碳水化合物鉴定试剂条对9株SZD菌株进行碳水化合物发酵试验， 根据碳水化合物发酵试验结果对其进行鉴定。结果 利用API 50CH系统将9株SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌。结论 API 50CH系统简单快捷， 可将乳酸杆菌鉴定至种的水平。 　　【关键词】 API 50CH；鉴定；棒状乳杆菌 　　D-乳酸（右旋乳酸）作为一种重要的化工原料， 在食品、医药、高分子材料等领域有着广泛的用途， 具有重要的经济价值[1]。乳酸的生产大多采用发酵法， 发酵法制备D-乳酸的主要技术瓶颈是缺乏产高光学纯度（光学纯度97%）D-乳酸的菌株[2]。作者从某发酵食品中分离并纯化出9株野生菌株， 产D-乳酸光学纯度达100%， 将其命名为SZD菌株， 初步鉴定为乳杆菌属（lactobacillus）。本文拟利用API 50CH鉴定系统对这9株野生菌株进行进一步鉴定。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料与试剂 9株SZD菌株均分离自陕西的一种发酵食品， 编号分别为SZD-1、SZD-2、SZD-3、SZD-4、SZD-5、 SZD-6、SZD-8、SZD-9、SZD-10， 其中具有代表性的4株（SZD-2、SZD-5、SZD-9、SZD-10）保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号分别为：CGMCC No.6891～6894。 　　MRS肉汤培养基基础（北京奥博星生物技术有限责任公司）， API50 CHL培养基及API50 CH碳水化合物鉴定试剂条均购自法国生物梅里埃公司。 　　1. 2 方法 按照API50 CH碳水化合物鉴定试剂条说明书进行。先制备相当于2个麦氏浊度的SZD菌株的菌悬液， 然后将菌悬液加到试剂条上的50个微生化管中， 最后用无菌液体石蜡封管静置35℃培养， 24 h及48 h各观察1次结果。试剂条变为黄色（25号管变为黑色）为阳性反应， 变为绿色（25号管除外）为弱阳性反应， 不变色为阴性反应， 以48 h观察到的结果作为最终结果。 　　2 结果 　　SZD菌株的碳水化合物发酵试验结果见表1。 　　3 讨论 　　形态特征、生理生化反应及代谢产物等表型特征是鉴定细菌最基本的依据。通过前期研究得知， 9株SZD菌株均为G+短杆菌， 无芽孢， 无分叉， 无动力， 兼性厌氧， 能在pH值为4.5的培养基中生长， 15℃生长良好， 45℃迟缓生长， 接触酶及氧化酶均为阴性， 不产吲哚和硫化氢， 不液化明胶， 从葡萄糖产乳酸但不产气。根据以上表型特征， SZD菌株鉴定为乳杆菌属， 但无法将其鉴定至种的水平[3]。 　　乳酸杆菌种水平的表型鉴定主要依据碳水化合物发酵试验。传统的发酵试验需配制或购买各种生化反应管， 费时费力， 且反应管种类较少， 使结果的判定受限。法国梅里埃公司研发的API 50CH鉴定系统专用于乳酸杆菌和相关菌的鉴定， 是世界范围内应用最广、种类最全、最受微生物学家推崇的国际标准化产品。一个试剂条包括49种碳水化合物的发酵反应， 接种菌后反应48 h即可判定结果。该系统试剂反应灵敏， 方法简单快捷， 鉴定结果可靠[4， 5]。该系统的缺点是价格昂贵， 不适于大规模菌种的鉴定， 而且鉴定到种水平的分辨力有限。Corsetti A等[6]利用API 50CH鉴定系统分析了317株可能为乳酸菌的菌株， 结果仅38%分离株被鉴定到种的水平。作者采用这一鉴定系统对9株SZD菌株进行的碳水化合物的发酵试验结果表明， 所有SZD菌株均发酵甘露醇、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖及甘露糖， 除SZD-4外均发酵麦芽糖， 部分菌株（SZD-3、SZD-4、SZD-5、SZD-9）发酵葡萄糖盐。所有菌株不发酵乳糖、苦杏仁苷、阿拉伯糖、纤维二糖、松三糖、木糖及海藻糖， 根据以上特性， 将SZD菌株鉴定为棒状乳杆菌（lactobacillus coryniformis）。 　　目前棒状乳杆菌分为棒状亚种（lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis）和扭曲亚种（lactobacillus coryniformis subsp. torquens）。棒状乳杆菌棒状亚种大部分（90%）发酵鼠李糖， 部分（11%～89%）水解七叶灵并发酵水杨苷、山梨醇、蜜二糖、棉子糖。棒状乳杆菌扭曲亚种大部分（90%）不水解七叶灵， 大部分（90%）不发酵鼠李糖、水杨苷、山梨醇、蜜二糖、棉子糖[7-9]。所有SZD菌株均水解七叶灵并发酵水杨苷， 部分菌株（SZD-1、SZD-2、SZD-3、