酶与蛋白质工程第9章固定化酶与固定化细胞.pptVIP

第九讲 固定化酶与固定化细胞 固定化酶的性质 1)选择合适的微载体类型 对细胞在不同微载体上的贴附性能进行评价，计算细胞贴壁率和细胞数,并绘制成曲线,比较细胞容纳量、微载体用量、搅拌速度,由此选出适当的微载体 2)浸泡水化及消毒 在玻璃容器内加入适量的微载体, 加入无Ca2+、Mg2+的磷酸缓冲液(PBS)浸泡3h以上,轻轻搅动。然后加入1/2的新鲜PBS再洗1次。高压蒸汽灭菌 3)接种 根据细胞类型决定接种浓度。微载体的浓度一般按2-3g/L配制,搅拌速度控制在50-70 r/min 4)培养观察与细胞计数 在显微镜下直接观察微载体上细胞的生长情况，将微载体上的细胞消化后计数并计算其浓度 5)传代培养 微载体上分离后的细胞可进一步做微载体传代培养。如果放大培养,可在细胞脱离微载体后，加入一些新的微载体以增加培养体积，也可在微载体长满细胞后直接加入新的微载体进行球传球接种 6)细胞消化与收获 通常采用酶消化法收获细胞。对于回收率要求不高的细胞种类分组沉降简单易行,而若要求高回收率,则可用过滤方法,采用100μm孔径的尼龙网、不锈钢网、多孔玻璃滤器等将细胞与微载体分离开 (2) 吸附法 分物理吸附法和离子交换吸附法 ① 物理吸附法 物理吸附法是将微生物细胞附着于固体载体上的一种固定方法。载体常用的多孔砖、瓷杯、木