分子生物学实验三.pptVIP

分子生物学实验 实验三从动物组织提取DNA 一、实验原理 动物组织细胞中的DNA大部分与蛋白质结合成核蛋白。蛋白酶K可以将大量的蛋白质降解，并使与蛋白质结合的DNA 解离出来，SDS的加入处理核蛋白，使DNA尽量与核蛋白分开，用酚:氯仿:异戊醇抽提将蛋白沉淀除去；加入适量的乙醇，沉淀出DNA，最后脱水干燥，就可得到DNA粗制品。上述过程，为了防止DNA酶解，提取时加入EDTA。此外，SDS也有抑制DNA或RNA酶解的作用。 Proteinase K，中文名为蛋白酶K。不含DNase，不含RNase，进口分装，可直接使用。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的?分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。 酶活力，30U/mg。在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的?量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。 在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。 蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。 在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲?液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、