细胞生物学实验考试范围.doc

细胞因子及抗体检测技术 1. 细胞因子的检测方法： 1) 生物学方法 ①依赖性细胞株 ：生物分析法 ②功能检测 ：生物分析法 2) 分子生物学方法 ①分子杂交技术 ：mRNA表达水平的测定 ②多聚酶链反应技术（PCR）：mRNA的测定 3）免疫学方法 ①免疫测定 ：免疫酶技术 ②功能测定与抗体抑制 2. 抗体检测技术 免疫酶技术 免疫荧光技术 间接血凝试验 放射免疫测定 蛋白印迹 免疫共沉淀亲和力测定 3. ELISA实验原理： ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的高度敏感性检测抗原或抗体 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性 ③按一定步骤进行抗原抗体反应 ④加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析 包被(coating)：将抗原或抗体固定在固相载体的过程。 封闭(blocking)：是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。 ⑴. ELISA出现“一片黄”的原因： ①酶结合物浓度过高②底物不新鲜③洗涤不干净 ⑵ELISA出现“一片白”的原因： ①载体吸附性能差 ②底物错 ③稀释液作包被液 ④加错试剂 ⑤包被时间过短 ⑥酶活力低或下降 ⑦样品含有NaN3 单克隆抗体的制备 1.抗体的定义 免疫球蛋白：（结构概念） 具有抗体活性并具有化学结构的球蛋白。 抗体：（功能概念）与相应抗原特异结合具有免疫功能的球蛋白 2.抗原：能与抗体结合的物质（能与T细胞的TCR或B细胞的BCR结合，促使其增殖、分化、产生抗体或致敏淋巴细胞，并与之结合，进而发挥免疫效应的物质。） 免疫原：可刺激产生抗体 半抗原 只能结合，不能诱发 与载体结合 抗原决定簇：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称抗原表位。 3.单克隆抗体定义：由一个B淋巴细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”。针对一个抗原决定簇，由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、性质均一、易于大量生产 抗体生产技术的三个时代 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 基因工程抗体 人源化 全人源 小型化 噬菌体抗体库 随着分子生物学发展，单抗技术有了新的突破 嵌合抗体 改型抗体 人源化抗体 转人基因小鼠 5. 亲本细胞的选择 骨髓瘤细胞： ①本身不分泌抗体 ②次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT-）或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）的骨髓瘤细胞 B淋巴细胞： ①经特定抗原免疫能产生目的抗体 ②免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致或有相近亲源关系 6. 有限稀释法(常用) ：从阳性分泌孔收集杂交瘤细胞，经逐步稀释，使每孔只有一个细胞。 转基因大动物研究 简答题: 1请简单列举一下转基因技术的方法: ? Pronuclear Injection 显微注射 ? Retroviral Vector Infection of Embryos 病毒载体转染胚胎 ? Sperm-mediated Gene Transfer 精子介导基因转移 ? ES cells 胚胎干细胞 ? Somatic Cell Nuclear Transfer or Cloning 体细胞核转移或克隆 2简述一下通过病毒载体转染胚胎,从而达到转基因目的的优缺点: Pros: ? Infect both dividing and non-dividing cells 感染分开的和未分开的细胞 ? High titer and broad target range by using VSVG envelop protein 具有较高的效价和宽广的靶位区间 ? Infect both embryos and embryonic stem cells 感染胎盘和胎盘干细胞 ? Successful in transferring genes to early embryos of mouse, rat, pig, cattle and monkey. 在小鼠，大鼠，猪，牛和猴子胎盘早期成功实施转移基因 Cons: ? Activation of proto-oncogenes (1 /100,000 cha