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Crick的中心法则（central dogma） From DNA to Protein DNA-mRNA-the encoded peptide RNA的转录(Transcription) 封闭复合物（closed complex） 转录的终止 转录的终止： 当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA polymerase 和RNA链均从DNA模板上释放出来。 Terminator: 通常含有自我互补区域(self-complementary regions) ，在RNA产物中可以形成stem-loop 或hairpin结构。 Two types of terminators in E. coli 不依赖于ρ因子的终止 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，长度 效率 ρ因子 RNA聚合酶 (RNA polymerase) RNA聚合酶是转录过程中最关键的酶。 主要以双链DNA为模板，以4种核苷三磷酸作为活性前体。 需要Mg2+/Mn2+为辅助因子。 它不需要任何引物。 以5’ ? 3’ 方向合成RNA链。 缺乏3’ ? 5’ 外切酶活性。 是一个含有多个亚单位(multi-subunit)的酶。 RNA聚合酶需执行的功能 识别DNA双链上的启动子； (2) 使DNA变性，在启动子处解旋成单链； (3) 通过阅读启动子序列，RNA pol 确定它自己的转录方向和模板链。 (4) 最后当它达到终止子时，通过识别停止转录。 原核生物(E.coli)的RNA聚合酶 2 alpha (α) subunit, 1 beta (β) subunit, 1 beta prime (β’) subunit, 1 omega (ω) subunit, 1 sigma (σ) subunit 原核生物(E.coli)的RNA聚合酶 在动、植物及昆虫的细胞中，RNA pol Ⅱ的活性可被低浓度的α-鹅膏蕈碱所抑制。但却不抑制pol Ⅰ。 Pol Ⅲ对α-鹅膏蕈碱的反应，不同的生物有所差异。在动物细胞中高浓度的α-鹅膏蕈可抑制转录，在昆虫中不受抑制。 真核生物RNA聚合酶的亚基 真核生物线粒体和叶绿体中存在不同的RNA聚合酶 线粒体中RNA聚合酶： 只有一条多肽链，相对分子量小于7 X 104，是已知最小的RNA聚合酶之一； 与T7噬菌体RNA聚合酶有同源性。 叶绿体中RNA聚合酶： 比较大； 结构上与细菌中的聚合酶相似，由多个亚基组成，部分亚基由叶绿体基因编码。 除RNA聚合酶之外，真核生物转录起始过程中至少还需要7种辅助因子参与，这些蛋白辅助因子统称为转录因子（transcription factor, TF）。 原核生物不同基因的启动子 -10序列 (Pribnow框盒) 其保守序列为TATAAT，位于-10bp左右，其中3′端的“T”十分保守。 A.T较丰富，易于解链。 它和转录起始位点一般相距5bp。 功能: RNA pol紧密结合; 形成开放启动复合体； 使RNA pol定向转录。 提纯被保护的片段后却发现，RNA聚合酶并不能重新结合或并不能选择正确的起始点，表明在保护区外可能还存在与RNA聚合酶对启动子的识别有关的序列。 -35序列 (Sextama盒) 其保守序列为TTGACA， 与-10序列相隔16-19bp。 功能: (1)为RNA pol的识别位点。 (2)RNA Pol的核心酶只能起到与模板结合和催化的功能，并不能识别-35序列，只有σ亚基才能识别-35序列，为转录选择模板链。 大部分启动子都存在这两段共同序列，即位于–10 bp处的TATA区和–35 bp处的TTGACA区。 它们是RNA聚合酶与启动子的结合位点,能与σ因子相互识别而具有很高的亲和力。 －10区和－35区的最佳距离 在原核生物中， －10区和－35区的最佳距离大约是16～19 bp。 过大或过小都会降低转录活性。 这可能是因为RNA Pol本身的大小和空间结构有关。 真核生物启动子的结构特点 上游启动子元件 （upstream promoter element，UPE）： 将TATA区上游的保守序列称为上游启动子元件或称上游激活序列（upstream activating sequence，UAS）。 增强子（Enhancer ） 增强子特点 ① 具有远距离效应。 常在上游-200bp处，但可增强远处启动子的转录，即使相距十几Kb也能发挥其作用； ② 无方向性。 无论在靶基因的上游，下游或内部都可发挥增强转录的作用； ③ 顺式调节。 只调节位于同一染色体上的靶基因，而对其它染色体上的基因无作用； ④ 无物种和基因的特异性