2.基因工程浅析.ppt

2. 基 因 工 程 2.1 基因工程概况 2.1.1基因工程的基本含义 按照人们的愿望（人为的），进行严密的设计（类似工程设计），通过体外DNA重组和转基因等技术（非生命活动过程） ，有目的地改造生物特性，使现有的物种在较短的时间内趋于完善（区别于自然突变和常规育种），创造出更符合人们需求的新的生物类型，或利用这种技术对人类疾病进行有效的诊断和治疗。 2.1.2 基因工程研究的主要理论依据 不同基因具有相同的遗传物质(DNA/RNA) 基因是可以从DNA上切割下来的 基因是可以转移的 多肽与基因之间存在对应关系 遗传密码是通用的(绝少数除外) 可以通过DNA复制把遗传信息传递给下一代 2.1.3 基因工程研究的基本技术路线 2.1.4 基因工程突出的优点 采用人为的方式实现了遗传物质在不同物种间的转移，打破了常规育种难以突破的物种之间的界限。 可以使原核生物与真核生物之间的遗传信息进行相互重组和转移 可以使动物与植物之间的遗传信息进行相互重组和转移 可以使人与其他生物间的遗传信息进行相互重组和转移 2.2.1 DNA一般性质 2.2.1.1 DNA的组成和结构 来源: 原核生物（主要是细菌） 功能: 自我保护作用 （1）限制（Restriction） 将侵入细菌体内的外源DNA切成小片断 （2）修饰（Modification）细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护，不能被自身的限制性内切酶识别切割 限制性内切核酸酶反应系统 酶 底物（DNA分子） 反应缓冲液 合适的反应温度 PCR技术的原理 ① DNA模板变性 ②引物与DNA模板退火 ③ 新DNA链延伸 ④ 新一轮循环开始 克隆载体种类 按构建克隆载体的材料来源分: 质粒克隆载体 病毒（噬菌体）克隆载体 线粒体克隆载体 叶绿体克隆载体 人工染色体克隆载体 ...... 按克隆载体的用途分: 一般克隆载体、建库载体、T或U载体 ...... 按克隆载体的受体生物分: 原核生物克隆载体 大肠杆菌克隆载体、放线菌克隆载体 ...... 真核生物克隆载体 酵母克隆载体、植物克隆载体、动物克隆 载体 、人克隆载体...... 2.3.4 基因表达载体 特点： 大部分原核生物细胞没有纤维素组成的坚硬细胞壁，便于外源DNA的进入; 没有核膜，染色体DNA没有固定结合的蛋白质，这为外源DNA与裸露的染色体DNA重组减少了麻烦; 基因组小，遗传背景简单，并且不含线粒体和质体基因组，便于对引入的外源基因进行遗传分析； 原核生物多数为单细胞生物，容易获得一致性的实验材料，并且培养简单，繁殖迅速，实验周期短，重复实验快。 种类： 酵母：基因结构相对比较简单，便于基因工程操作；培养简单，适于大规模发酵生产，成本低廉；外源基因表达产物能分泌到培养基中,便于产物的提取和加工；不含特异性的病毒，不产生毒素，是安全的受体细胞。 植物细胞：具全能性。 有水稻、棉花、玉米、马铃薯、烟草和拟南芥等。 动物细胞：目前多采用生殖细胞、受精卵细胞或胚细胞以及干细胞。 有猪、羊、牛、鱼、鼠、猴等。 2.5.2 重组DNA分子导入受体细胞 2.5.2.1 外源DNA转化方法 化合物诱导转化法 根癌农杆菌介导转化法 电穿孔转化法 微弹轰击(基因枪)转化法 激光微束穿孔转化法 超声波处理转化法 脂质体介导转化法 体内注射转化法 花粉管通道转化法 精子介导法 低能离子束介导转化法 蛋白质凝胶电泳法鉴定重组子 免疫检测法鉴定重组子 质谱分析法 2.6.1 基因工程技术用于疾病诊断 2.6.2 基因工程技术用于研制药物 2.6.3 基因工程技术用于转基因植物 2.6.4 基因工程技术用于转基因动物 2.6.5 基因工程的安全性问题与对策 基因工程 2.5.2.1 外源DNA转化方法 ③同时酚类物质也诱导Ti质粒上的vir基因表达，产生的蛋白质能够将Ti质粒上的T-DNA单链切下，并将其转移到植物细胞中。 基因工程 2.5.2.1 外源DNA转化方法 ④单链T-DNA在LB和RB帮助下整合到植物基因组上，使植物发生肿瘤。 tmt opine opine synthas 基因工程 2.5.2.1 外源DNA转化方法 2.5.2.2 病毒(噬菌体)颗粒转导法 用病毒(噬菌体)的 DNA（或cDNA）构建成重组DNA，在体外包装成重组病毒(噬菌体) 颗粒，通过感