2+菌种选育(上)浅析.pptVIP

在l升烧杯中加入450ml蒸馏水（溶液A）： NH4Cl 0.5g Na2HPO4 3.0g KH2PO4 1.5g 用lN NaOH调整pH到7.4; 制备溶液各50ml： 1M MgSO4.7H2O 20% (w/v)Dextrose(葡萄糖) 1M CaCl2 上述溶液分消。 混合： 1ml MgSO4.7H2O (1 M)，5ml葡萄糖（20%），50ml氯化钙(lM)，450ml溶液A。 ２０世纪６０年代初，前苏联及美国的科学家将植物种子搭载卫星上天，在返回地面的种子中发现其染色体畸变频率有较大幅度的增加。 １９９６年至１９９９年，俄罗斯等国在“和平号”空间站成功种植小麦、白菜和油菜等植物。 三.菌种的衰退与复壮 菌种遗传特性的改变和菌种生理状况的改变 原因： 连续传代 保藏条件及保藏操作不当 菌种的自发突变和回复突变等自身突变 菌种的复壮 菌种的复壮方法 ： 纯种分离,淘汰已衰退的个体 在复壮前，仔细分析和判断菌种是衰退、污染还是仅仅是一般性的表型改变。 防止菌种退化的措施 提供良好的环境条件，减少传代次数 用优良的保藏方法 定期纯化菌种(菌种的复壮) 五种碱基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亚氨基的互变异构。这两种异构体的平衡关系受介质酸碱环境的影响。 pH5～5.5：形成HNO2引起菌种突变； 碱性：以重氮甲烷的形式对DNA起烷化作用； pH=6：两者均不产生，诱变效应可能是由于NTG本身对核蛋白体引起的变化所致。 NTG在缓冲液中较难溶解，而甲酰胺中溶解度较大，用甲酰胺溶解NTG，可提高处理浓度。用300μg/mL NTG 、28oC处理60 min，易得到高产菌株。 （6）航天育种 概念：利用空间环境高真空、微重力和强辐射的特点，在宇宙射线辐射的作用下，使生物的遗传性状发生变异，从而选育出优良菌种。 利用返地卫星或高空气球搭载植物种子进行航天育种，已获得满意结果。 利用航天育种技术进行微生物遗传育种国内尚处起步阶段。 1996年以来，国防科工委863-2办公室相继组织了返地卫星和高空气球搭载微生物、动物细胞和植物种子，为微生物诱变育种提供了新手段。 中国农业科学院航天育种中心(利用航天卫星及地面模拟航天环境因素诱发主要农作物遗传变异) （3）生长因子产生菌的筛选 核苷酸等生长因子的生产不能作为分离步骤中的选择压力，可用随机办法分离产生菌，并通过筛选试验检出产生菌。 例如：通过观察分离株能否促进营养缺陷型的生长，便可检出生长因子产生菌。 （4）多糖产生菌的筛选 曾从各种环境中分离出多糖产生菌，制糖工业污水中可能含有很多这种菌种。 可从菌落的黏液状外观识别这类产生菌。 第二节 菌种选育 菌种选育理论基础：微生物遗传学、生物化学等。 菌种选育目的：获得高产优质生产菌株，发展新品种。 要求菌种选育者：掌握微生物学、生物化学、遗传学基本原理，国内外有关先进科学技术。 经典育种：自然选育和诱变育种 定向育种：转化、转导、接合、原生质体融合、代谢调控和基因工程等。 自然选育：利用菌种自然突变(Spontaneous Mutation)进行菌种筛选的过程。 自然突变：微生物在没有人工参与下所发生的突变。 引起自然突变两个原因：多因素低剂量的诱变效应和互变异构效应。 一、 自然选育 多因素低剂量诱变效应：自然突变实质上是由一些原因不详的低剂量诱变因素引起的长期综合效应，如宇宙空间各种短波辐射、自然界中普遍存在的一些低浓度诱变物质以及微生物自身代谢活动中所产生的一些诱变物质(如H2O2)的作用等。 互变异构效应：五种碱基第六位上的酮基和氨基，T和G可以酮式或烯醇式出现，C和A可以氨基或亚氨基形式出现。 平衡倾向于酮式和氨基时，DNA双链中以AT和GC碱基对为主。 T以烯醇式出现，在DNA复制到达该点的一瞬间，与G配对；C以亚氨基出现时，在新合成的DNA单链的C点出现A—可能的自然突变原因。碱基对发生自然突变几率约10-8～10-9。 自然突变两种情况：1、菌种衰退和生产质量下降；2、对生产有益的突变。 为此，菌株应定期纯化，保存优