第五章凝胶层析要素.ppt

凝胶层析 gel-filtration chromatography 凝胶层析的基本原理 凝胶层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶作为固定相，对混合物中各组份按分子大小进行分离的层析技术，又称为分子筛，凝胶/分子筛排阻层析。 凝胶层析可用于重组蛋白溶液脱盐、分子量测定以及除去热原物质分离纯化。 操作简便，分离效果好，重复性高，回收率高，分离条件温和。 分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，会被全部排阻在凝胶颗粒之外，即全排阻；两种全排阻的分子即使大小不同，也不能分开；它们下行速度都快。 分子直径比凝胶最小孔隙直径小的，能进入凝胶颗粒的全部孔隙即使大小不同也不能分开；它们的下行速度都慢。 2 凝胶介质的基本性质 葡聚糖凝胶 Sephadex G-系列 聚丙烯酰胺凝胶 Sephacryl系列 琼脂糖凝胶 Sepharose系列 Superose系列 葡聚糖凝胶的种类有G10、G15、G25、G50、G75、G100、G150、G200，G50即表示每克干凝胶的吸水量为5.0毫升。 葡聚糖凝胶对碱比较稳定，在酸性环境中其糖苷键易水解。 湿态的葡聚糖可加热到110℃，干的则能耐受120℃高温。 Sephadex LH是羟丙基化的Sephadex，这类层析介质的流动相既可使用缓冲水溶液，也可使用极性有机溶剂，因此适用于非水溶性溶质的凝胶过滤 。 琼脂糖凝