中药中重金属镉酶联免疫检测方法.docVIP

发明专利申请公开说明书 发明名称 定量检测中药中重金属镉离子含量试剂盒及其检测方法 摘要 本发明属于免疫学分析技术领域的一种定量检测重金属镉离子含量的试剂盒及其检测方法，适用于中药中重金属镉离子残留的检测。本试剂盒以高特异性重金属镉离子多抗为检测抗体，采用间接竞争ELISA技术，测定的基础是标记免疫反应。其试剂盒包括试剂组和包被板。本发明灵敏度高，准确性好，结果稳定。检测方法操作简单，价格低廉，具有良好的社会效益和经济效益。 权利要求书 一种采用间接竞争酶联免疫技术定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂组和包被板构成。 根据权利要求1所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：所述的试剂组为： （1）浓缩PBS缓冲液：40mM 磷酸盐缓冲液，pH 7.4，使用时用双蒸水5倍稀释； （2）底物A：含过氧化氢脲的乙酸钠缓冲溶液； （3）底物B：3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)的二甲基亚砜溶液； （4）浓缩洗涤液：含1% 吐温-20的磷酸盐缓冲溶液，使用时用双蒸水5倍稀释； （5) 终止液：1.25M的硫酸； （6）重金属镉离子标准溶液：将Cd离子与螯合剂EDTA（摩尔比是1：1）充分螯合成500PPM的标准品，使用时用PBS缓冲溶液稀释成1PPM后，再按1：5稀释6个梯度。 （7）抗体：用PBS将抗体稀释10000倍； （8）山羊抗兔：将羊抗兔用PBS稀释20000倍； 3. 根据权利要求1所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：包被板为96孔或48孔酶标板，是由Cd-ITCBE-BSA包被抗原包被于酶标板上，然后以每孔100μL包被于酶标板中，4℃过夜，弃去包被溶液后用洗涤液洗板三次，加入200μL冻干液封闭1小时，洗涤液洗板四次冻干后真空包装，于4℃保存。 4. 根据权利要求3所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：多克隆抗体是选用雄性大耳兔进行五次免疫后，由兔子耳缘静脉取血进行效价和特异性测定，筛选出具有高效价和特异性的抗血清，然后用Sepharose 4B-Protein A柱亲和层析法纯化得到的抗体。 5. 根据权利要求3所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：冻干液为含BSA的Tris-HCl缓冲溶液。 6. 根据权利要求2所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒，其特征在于：包被抗原是按下述方法制备的：取等摩尔的Cd离子与螯合剂ITCBE混合反应,调节pH值至7.4.在25℃下,使用磁力搅拌器搅拌24h,制备得到半抗原。将半抗原与一定量的载体蛋白BSA混合，调节PH至9.0.在25℃下，使用磁力搅拌器搅拌24h后，用5mmol/L的HEPES缓冲溶液透析三天。 7. 根据权利要求1所述的定量检测中药中重金属镉离子含量的试剂盒的检测方法包括以下步骤： 说明书 定量检测中药中重金属镉离子含量试剂盒及其检测方法 技术领域 本发明属于免疫学分析技术领域的一种定量检测重金属镉离子含量的试剂盒及其检测方法，涉及到有机化学合成、免疫化学、生物化学等技术，适用于中药中重金属镉离子残留的快速检测。 背景技术 镉（Cadmium，Cd），第 5 周期，IIB 族，原子序数 48，相对原子质量为112.4。镉是一种稀有的重金属元素，与氧、氯、硫等化学元素形成无机化合物。镉主要以镉盐的形式存在。镉盐多为无色，但硫化物为黄色或橙色。不同形式镉的其毒性是不同的。越易溶于水的镉盐，对动植物和人体的毒性越高。20 世纪 50 年代日本爆发了由镉引起的“骨痛病”事件，此后，类似事件经常发生。1972 年，FAO/WHO 把镉列为第三位优先研究的食品污染物，后美国毒物管理委员会(ATSDR)将其列为第六位危及人类健康的有毒物质。镉在肾脏的一般蓄积量与中毒阈值很接近，安全系数很低。它的生物半衰期长，排泄缓慢，少量镉持续进入体内可因长期蓄积而造成各组织器官不同程度的损伤，而且还有致癌、致畸、致突变作用。检测控制人体对镉的摄入，是预防和减少镉对人体危害的重要措施。目前，镉与健康的研究课题，已经在世界上引起广泛的关注。 传统的检测方法虽然能够准确测定镉的含量，但需要专门的仪器设备，步骤繁琐，检测成本高，耗时长，样品需要经过复杂的预处理，需要专门的技术人员来完成，难以满足对环境及市场产品现场快速检测的要求。重金属离子免疫检测是一种新型的检测方法，与传统检测方法相比,具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点。且可以用于重金属的快速检测和常规检测，发展和普及应用潜力很大。 酶联免疫法（Enzyme -linked immunosorb