(优)蛋白质表达1.pptVIP

克隆方案I：分泌表达含有天然N端蛋白质 克隆方案II：分泌表达含有非天然N端的蛋白质 克隆方案III：分泌表达C端含有HA-Tag的蛋白质 单柱蛋白纯化 无需蛋白酶 用于蛋白质的连接和特殊标记 用于抗体的分析纯化 多角体蛋白基因的启动子非常强，把目的蛋白的基因接在其启动子后能高水平地表达目的蛋白。构建重组杆状病毒AcMNPV的转运载体和AcMNPV DNA共转染培养的昆虫细胞，几天后可收到目的蛋白。 Pp:多角体蛋白基因的启动子 Pt:多角体蛋白基因的终止序列 MCS:多克隆位点 哺乳动物细胞表达系统最大的优点是能表达翻译后修饰过的外源蛋白 哺乳动物细胞表达系统的缺点是，对组织细胞培养技术要求高，培养和筛选细胞株的周期长 常用的细胞系有：非洲绿猴肾细胞（COS）、小仓鼠肾细胞（BHK）、人的胚胎肾细胞（HEK-239）、中国仓鼠卵巢细胞（CHO） 哺乳动物细胞表达系统 哺乳动物细胞表达系统的表达载体 但是目的基因要接上增强翻译和有助于分泌和纯化的序列： kozak序列（K） 信号序列（S） 蛋白纯化标签（T） 蛋白酶切位点（P） 终止密码子（SC） 5`UTR、3`UTR有助于RNA的稳定性并提高翻译效率 酵母菌表达外源基因的优势： 全基因组已测序，表达调控机理比较清楚，遗传操作简便 具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统 能将外源基因表达产物分泌至培养基中（分泌型