实验12 琼脂糖凝胶电泳检测DNA.pptVIP

实验十三 琼脂糖凝胶电泳 实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理和方法。 熟悉琼脂糖凝胶电泳的实验步骤。 琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下： (1)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快。 (2)琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98-99%)，近似自由电泳，样品扩散度较自由电泳小，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 (3)琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯监测及定量测定。 (4)电泳后区带易染色，样品易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。 琼脂糖凝胶电泳的缺点： (1) 机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 (2) 易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 (3) 琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。 (4) 与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。 实验原理 (1)DNA分子的大小 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。DNA分子的电荷/分子量比是恒定的 。这样，DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。